方便快捷的分析過程固然重要,，但是為了多做樣品而忽略了一些*的步驟，往往得不償失。哪些操作不能做,？哪些懶兒不能偷,？那些小概率的故障師傅沒教怎么辦？液相使用過程中有哪四大關(guān)鍵因素要注意,？

流動(dòng)相不過濾
因?yàn)閴m?；蚱渌魏坞s質(zhì)微粒都會(huì)磨損柱塞、密封環(huán),、缸體和單向閥,，因此應(yīng)預(yù)先除去流動(dòng)相中的任何固體微粒。流動(dòng)相在玻璃容器內(nèi)蒸餾,，而常用的方法是濾過,，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器。泵的入口都應(yīng)連接砂濾棒（或片）,。輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常清洗或更換,。
使用后沒有及時(shí)清洗泵
流動(dòng)相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì)，含有緩沖液的流動(dòng)相不應(yīng)保留在泵內(nèi),，尤其是在停泵過夜或更長(zhǎng)時(shí)間的情況下,。如果將含緩沖液的流動(dòng)相留在泵內(nèi)，由于蒸發(fā)或泄漏,，甚至只是由于溶液的靜置,，就可能析出鹽的微細(xì)晶體，這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱塞等,。因此,，必須泵入純水將泵充分清洗后，再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護(hù)的溶劑（對(duì)于反相鍵合硅膠固定相,，可以是甲醇或甲醇-水）,。
流動(dòng)相走空
泵工作時(shí)要留心防止溶劑瓶?jī)?nèi)的流動(dòng)相被用完，否則空泵運(yùn)轉(zhuǎn)也會(huì)磨損柱塞,、缸體或密封環(huán),，zui終產(chǎn)生漏液。
沒有流動(dòng)相流出,，又無壓力指示怎么辦,？
可能是泵內(nèi)有大量氣體，這時(shí)可打開泄壓閥,，使泵在較大流量（如5ml/min）下運(yùn)轉(zhuǎn),，將氣泡排盡，也可用一個(gè)50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體,。另一個(gè)可能原因是密封環(huán)磨損,，需更換。
壓力和流量不穩(wěn)了？
原因可能是氣泡,，需要排除,；或者是單向閥內(nèi)有異物，可卸下單向閥,，浸入丙酮內(nèi)超聲清洗,。有時(shí)可能是砂濾棒內(nèi)有氣泡，或被鹽的微細(xì)晶?；蜃躺奈⑸锊糠侄氯?，這時(shí)，可卸下砂濾棒浸入流動(dòng)相內(nèi)超聲除氣泡,，或?qū)⑸盀V棒浸入稀酸（如4mol/L硝酸）內(nèi)迅速除去微生物,，或?qū)Ⅺ}溶解，再立即清洗,。
壓力為啥過高或過低？
可能是是管路被堵塞,，需要清除和清洗,。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時(shí)應(yīng)逐段進(jìn)行,。
在進(jìn)行梯度洗脫時(shí),，由于多種溶劑混合，而且組成不斷變化,，因此帶來一些特殊問題,，必須充分重視：
梯度洗脫的流動(dòng)相選擇不當(dāng)
要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動(dòng)相,。有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶,，超出范圍后就不互溶，使用時(shí)更要引起注意,。當(dāng)有機(jī)溶劑和緩沖液混合時(shí),，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時(shí)需特別小心,。
忽略的空白梯度洗脫
梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高,，以保證良好的重現(xiàn)性。進(jìn)行樣品分析前必須進(jìn)行空白梯度洗脫,，以辨認(rèn)溶劑雜質(zhì)峰,，因?yàn)槿跞軇┲械碾s質(zhì)富集在色譜柱頭后會(huì)被強(qiáng)溶劑洗脫下來。用于梯度洗脫的溶劑需*脫氣,，以防止混合時(shí)產(chǎn)生氣泡,。
忽略了溶劑混合所帶來的粘度變化
混合溶劑的粘度常隨組成而變化，因而在梯度洗脫時(shí)常出現(xiàn)壓力的變化。例如甲醇和水粘度都較小,，當(dāng)二者以相近比例混合時(shí)粘度增大很多,，此時(shí)的柱壓大約是甲醇或水為流動(dòng)相時(shí)的兩倍。因此要注意防止梯度洗脫過程中壓力超過輸液泵或色譜柱能承受的zui大壓力,。
關(guān)于六通閥的正確使用和維護(hù)：
①樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45μm濾膜過濾,，以減少微粒對(duì)進(jìn)樣閥的磨損。
②轉(zhuǎn)動(dòng)閥芯時(shí)不能太慢,，更不能停留在中間位置,，否則流動(dòng)相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增,，甚至超過泵的zui大壓力,；再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時(shí)，過高的壓力將使柱頭損壞,。
③為防止緩沖鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中,，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。通?？捎盟疀_洗,，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗,。
關(guān)于色譜柱的使用和維護(hù)　　
色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要,，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞,。在色譜操作過程中,，需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱,。
調(diào)節(jié)流速太快
避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng),。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料,，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行,，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過緩（如前所述）。
反沖色譜柱
一般說來色譜柱不能反沖,，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí),，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效,。
預(yù)柱和保護(hù)柱
選擇使用適宜的流動(dòng)相（尤其是pH）,，以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱,，分析柱是鍵合硅膠時(shí),，預(yù)柱為硅膠,，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解,。
避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi),，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱,。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換,。