(1) 準備 100~1500 ug/ml 的標準品, 溶于 Bradford 法相兼容緩沖液中,。對于較稀的樣品,，可能通過增加樣品在試劑體積中的比率而擴大靈敏度（microBradfordassay:1~25ug/mL)。如果樣品與染料的比值太高, 可能會增加反應混合物的 PH 而導致反應背景較高,。

(2) 將標準品和待測樣品加人到一次性的比色皿中 (應該使用一次性的塑料比色皿或微孔板,，因為染料會黏附到各種材料容器的表面上）。

(3)Bradford 試劑預熱至室溫,。將 ImL 染料溶液加人到 25 uL 蛋白質樣品中,，混勻，室溫孵育 10 min,。

(4) 檢測 450rnn 和 595nm 處的吸光度 (可以使用 570~610nm 的基于濾光器的儀器,，對檢測性能不會有明顯的降低）。

(5) 對 595 nm 處的數據作圖,，或為提高在低反應值處的精度,，對 595 nm/450 nm 的比率作圖。標準反應曲線可以擬合為一個多項式反應,，由此可以估算出待測樣品的濃度值.