(一)如何避免細(xì)胞污染
細(xì)胞污染的種類可分成細(xì)菌,、真菌、霉菌,、病毒等,。主要的污染原因為無菌操作技術(shù)不當(dāng)、操作室環(huán)境不佳,、污染的血清和污染的細(xì)胞等,。嚴(yán)格無菌操作技術(shù)、清潔的環(huán)境,、與品質(zhì)良好的細(xì)胞來源和培養(yǎng)基配制是減低污染的方法,。
(二)支原體 (mycoplasma)污染的細(xì)胞, 對細(xì)胞培養(yǎng)有何影響
不能以肉眼觀察出支原體污染異狀,。除極有經(jīng)驗的專家外,,大多數(shù)遭受支原體污染的細(xì)胞株,無法以其外觀分辨,。
支原體污染幾乎可影響所有細(xì)胞的生長參數(shù),,代謝及研究任一數(shù)據(jù),。故進行實驗前,必須確認(rèn)細(xì)胞為 mycoplasma-free,,實驗結(jié)果的數(shù)據(jù)方有意義,。
(三)培養(yǎng)基保存于 4 ℃ 冰箱中,顏色會偏暗紅色,,且 pH 值會越來越偏堿性
培養(yǎng)基保存于 4 ℃ 冰箱中,,培養(yǎng)基內(nèi)的 CO2 會逐漸溢出,造成培養(yǎng)基越來越偏堿性,,而培養(yǎng)基中的酸堿指示劑 (通常為 phenol red)的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅,。培養(yǎng)基偏堿的結(jié)果,將造成細(xì)胞生長停滯或死亡,。若培養(yǎng)基偏堿時,,可以通入無菌過濾 CO2 ,以調(diào)整 pH 值,?;蛩釅A調(diào)PH。
(四)L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎,?它在溶液中不穩(wěn)定嗎,?
L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時是重要的。脫掉氨基后,,L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源,、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解,,L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成,,而氨對于一些細(xì)胞具有毒性。
(五)什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅,?培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么,?
酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為 PH 值的指示劑:中性時為紅色,酸性時為黃色,,堿性時為紫色,。由于酚紅干擾檢測,一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測時,,不使用加有酚紅的培養(yǎng)基,。
丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源,盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,,但是,,如果沒有葡萄糖的話,細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。
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