本試劑盒只能用于科學研究,,不得用于醫(yī)學診斷,。
雞半乳凝素1(GAL1)ELISA檢測試劑盒使用說明書
【雞半乳凝素1(GAL1)ELISA檢測試劑盒 試劑盒名稱】
雞半乳凝素1(GAL1)ELISA檢測試劑盒
【雞半乳凝素1(GAL1)ELISA檢測試劑盒 試劑盒用途】
定量雞血清,、血漿及相關液體樣本中半乳凝素1(GAL1)的含量
【雞半乳凝素1(GAL1)ELISA檢測試劑盒檢測原理】
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),。將標準品,、待測樣本加入到預先包被半乳凝素1(GAL1)透明酶標包被板中,,溫育足夠時間后,,洗滌除去未結合的成分,,再加入酶標工作液,,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分,。依次加入底物A,、B,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉化為藍色產物,,在酸的作用下變成黃色,,顏色的深淺與樣品中半乳凝素1(GAL1)濃度呈正相關,,450nm波長下測定OD值,根據標準品和樣品的OD值,,計算樣本中半乳凝素1(GAL1)含量,。
【雞半乳凝素1(GAL1)ELISA檢測試劑盒 試劑盒組成】
1 |
| 酶標包被板 | 12孔×8條 | 7 | 底物夜A | 6mL |
2 |
| 標準品:200ng/ml | 0.6mL | 8 | 底物夜B | 6mL |
3 |
| 20倍濃縮洗滌液 | 20mL | 9 | 終止液 | 6mL |
4 |
| 標準品稀釋液 | 6mL | 10 | 說明書 | 1份 |
5 |
| 樣本稀釋液 | 6mL | 11 | 封板膜 | 1張 |
6 |
| 酶標試劑 | 6mL | 12 | 密封袋 | 1個 |
備注:標準品用標準品稀釋液依次稀釋為:200、100,、50,、25、12.5,、6.25ng/ml
【雞半乳凝素1(GAL1)ELISA檢測試劑盒需要而未提供的試劑和器材】
1,、37℃恒溫箱
- 標準規(guī)格酶標儀
- 精密移液器及一次性吸頭
- 蒸餾水
- 一次性試管
- 吸水紙
【雞半乳凝素1(GAL1)ELISA檢測試劑盒操作步驟】
1、準備:從冰箱取出試劑盒,,室溫復溫平衡30分鐘,。
2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液,。
3,、加標準品和待測樣本:取足夠數(shù)量的酶標包被板,固定于框架上,,分別設置標準品孔,、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,,在標準品孔中加入標準品50μL,;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍),;空白對照孔不加,。
4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。
5,、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,,每孔加滿洗滌液,,靜置1min,甩去洗滌液,,吸水紙上拍干,,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
6,、加酶標工作液:每孔加入酶標工作液50μL,,空白對照孔不加。
7、溫育:重復4的操作,。
8,、洗板:重復5的操作。
9,、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,,再加入顯色劑B液 50μL,37℃避光顯色15min,。
10、終止:取出酶標板,,每孔加終止液50μL,,終止反應(顏色由藍色立轉黃色)。
11,、測定:以空白孔調零,,在終止后15分鐘內,用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值),。
12,、計算:根據標準品的濃度及對應的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,,再根據樣本的OD值,,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,也可以使用各種應用軟件來計算,。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù),。
【雞半乳凝素1(GAL1)ELISA檢測試劑盒 樣本要求】
1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3),,因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑,。
2、標本采集后盡早進行提取,,提取按相關文獻進行,,提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗,,可將標本放于-20℃保存,,但應避免反復凍融。
3,、樣本應充分離心,,不得有溶血及顆粒。
【雞半乳凝素1(GAL1)ELISA檢測試劑盒注意事項】
1,、實驗嚴格按照說明書的操作進行,,實驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
2,、酶標包被板開封后如未用完,,應立即裝入密封袋中加干燥劑保存,。
3、建議所有的標準品,、樣本和空白對照都做雙份檢測,,取平均值,以減小實驗誤差,。
4,、牢記樣本已經稀釋5倍,計算結果乘以5才是樣本實際濃度,。
5,、本試劑盒定量范圍為0.1-200ng/ml,超過此范圍,,為標準曲線延伸計算所得,,不做為準確定量結果,請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果(0.1-200ng/ml范圍內),,乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度,。
6、若顯色過淺,,可適當延長底物溫育時間,。
7、為避免交叉污染,,標準品,、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分,,要懸臂加樣,不得碰到微孔,;不得重復使用封板膜,。
8、試劑盒保質期內使用,,不同批號的試劑不得混用,。
9、底物B對光敏感,,避免長時間暴露于光下,。
【雞半乳凝素1(GAL1)ELISA檢測試劑盒操作程序總結】
準備試劑,樣品和標準品
加入準備好的樣品和標準品,,37℃反應30分鐘
洗板4次,,加入酶標試劑,37℃反應30分鐘
洗板4次,加入顯色液A,、B,,37℃顯色15分鐘
加入終止液
15分鐘之內讀OD值
計算
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