4-甲基咪唑的液相色譜(HPLC)檢測(cè)方案

近日、據(jù)英國(guó)《每日郵報(bào)》報(bào)道,，美國(guó)某公益組織檢測(cè)多個(gè)國(guó)家的可口可樂(lè)中4-甲基咪唑的含量,，發(fā)現(xiàn)美國(guó)355毫升可口可樂(lè)中4-甲基咪唑含量為4微克,，中國(guó)為56微克,英國(guó)為135微克，巴西則高達(dá)267微克,。4-甲基咪唑源于生產(chǎn)飲料所用的焦糖色素中,，焦糖色素與其他人工合成色素相比，具備價(jià)格價(jià)廉,、安全無(wú)毒等優(yōu)點(diǎn),，被越來(lái)越廣泛地應(yīng)用于醬油、醋,、可樂(lè),、冷飲等食品工業(yè)中。然而,，因?yàn)榻固巧卦谥圃爝^(guò)程中往往要使用氨或銨鹽,，這種物質(zhì)和其它原輔料發(fā)生反應(yīng)，生成附帶產(chǎn)物4-甲基咪唑,。4-甲基咪唑?yàn)樯窠?jīng)毒,，能引起驚厥。長(zhǎng)期食用會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物長(zhǎng)腫瘤,，有可能會(huì)對(duì)人體造成致癌風(fēng)險(xiǎn),。

針對(duì)“可樂(lè)致癌”事件，億鑫儀器參考大量的文獻(xiàn)方法,，利用全新高性能的LC-10Tvp液相色譜儀,，經(jīng)實(shí)踐檢驗(yàn)可提供焦糖色素中4-甲基咪唑的HPLC檢測(cè)方案，得出的結(jié)果準(zhǔn)確可靠,，檢出限好,，僅供廣大用戶參考,。

以下是液相色譜法對(duì)焦糖色素中的4-甲基咪唑的詳細(xì)檢測(cè)方法。

1,、儀器與試劑

1．1儀器,、設(shè)備

LC-10Tvp液相色譜儀

Vertex 色譜柱：150mm×4.6mm×5μm；

分析天平,；

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,；

分液漏斗250ml；

振蕩器,；

針頭過(guò)濾器,；

微孔濾膜：0.45µm

1.2試劑

甲醇（色譜純）；

無(wú)水乙醇,；

CHCl3,；

CHCl3-無(wú)水乙醇萃取液（80: 20)：移取80 mL的
CHCl3及20 mL的無(wú)水乙醇混合均勻備用。

碳酸鈉,。

碳酸鈉溶液（100 g/L )：準(zhǔn)確吸取碳酸鈉100 g于1 000 mL容量瓶中,，用水定容至刻度。

庚烷磺酸鈉

磷酸二氫鉀

磷酸

磷酸二氫鉀緩沖液（0.05mol/L）：稱取磷酸二氫鉀6.8g,，庚烷磺酸鈉1g于1000ml容量瓶中，加水900ml,，用稀磷酸調(diào)pH至3.5,，用水定容至1000ml。

4-甲基咪唑標(biāo)準(zhǔn)品：純度>99 %o

4-甲基咪唑標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱取0. 1 000 g 4-甲基咪唑于100 mL的容量瓶中,，用流動(dòng)相溶解定容至刻度,。4-甲基咪唑含量1. 0 mg/mL，作為貯備溶液,。

2,、試樣溶液的制備

準(zhǔn)確稱取3g樣品（至0. 001 g)，加15mL水溶解,，移入250 mL分液漏斗中,，加100 g/L碳酸鈉溶液15 mL，加
CHCl3-無(wú)水乙醇萃取液60 mL,，劇烈振搖5 min,。靜置分層后，將有機(jī)相移入另一分液漏斗中,，水相再按同樣方法萃取一次,，合并有機(jī)相；用100 g/L碳酸鈉溶液洗滌提取液3次,，每次30mL,。然后將有機(jī)相通過(guò)無(wú)水硫酸鈉濾入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中,，50℃濃縮至近干，取下,，以水溶解殘?jiān)⒍ㄈ葜?0ml,，經(jīng)0.45µm微孔膜過(guò)濾后供HPLC分析。

3,、色譜條件

色譜柱：C18, 4. 6 mmx250 mm,，粒度5 µm

流動(dòng)相：甲醇: 0. 05 mol/L磷酸二氫鉀緩沖液（(pH 3.5，含0. 1％庚烷磺酸鈉）=5: 95

波長(zhǎng)：210nm

流速：1. 0 mL/min

4,、樣品測(cè)定

標(biāo)準(zhǔn)曲線：將4-甲基咪唑標(biāo)準(zhǔn)溶液配置成一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,，分別進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液各10µL，進(jìn)行HPLC分析,，然后以峰面積為縱坐標(biāo),，以4-甲基咪唑的含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。

樣品測(cè)定：吸取10 µL試樣溶液進(jìn)行HPLC分析,，測(cè)定其峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得測(cè)定液中4-甲基咪唑的含量

5,、4-甲基咪唑的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖