色譜分析中出現(xiàn)鬼峰怎么辦?

鬼峰產(chǎn)生的原因是多種多樣的,，根據(jù)本人的經(jīng)驗以及文獻報道,，將原因歸納為以下幾個方面：1、流動相,、樣品稀釋液、儀器或是容器中存在雜質(zhì),，當梯度開始時由于有機相比例不高,，洗脫能力不強，雜質(zhì)在色譜柱柱頭富集,，隨著流動相比例變化,，洗脫能力增強，富集的雜質(zhì)被洗脫,，從而形成鬼峰,。2、流動相脫氣不*,?？諝庠谟袡C相和水中的溶解度不同，當水和有機相混合時,，氣泡就產(chǎn)生了3,、操作問題情況梳理一1、試劑問題

a) 有機溶劑

甲醇制備工藝相對乙腈來說較為簡單,，雜質(zhì)含量也較少,。但是由于甲醇紫外吸收范圍比乙腈廣，所以當使用紫外檢測器時,，尤其是波長較低時,，盡量使用乙腈作為有機相，用甲醇的話漂移太大,。而用作梯度色譜的乙腈質(zhì)量要求較高,，一般用進口梯度色譜乙腈能夠很好的減少鬼峰的出現(xiàn)。

b) 水

很多單位用自制蒸餾水作為水相,，但是結(jié)果并不是很好,。原因就是一些低沸點的有機雜質(zhì)并不能夠通過蒸餾除掉。有條件的盡量用HPLC級的純水，沒有條件的也可用娃哈哈或是屈臣氏等水代替,，但是如果色譜條件比較嚴格也是有可能出問題的,。

c) 其它試劑

緩沖鹽、TFA,、EDTA等試劑也會對流動相造成很大的影響,，盡量用純度高的試劑配制流動相。

2,、儀器問題

a) 液相的流動相管路被污染,。

長時間的使用含水量較高的流動相(尤其是加入緩沖鹽的)，細菌就容易在管路中滋生,，細菌的代謝產(chǎn)物或是細胞碎片能造成鬼峰,。

b) 輸送泵故障，造成系統(tǒng)壓力不穩(wěn),，從而產(chǎn)生鬼峰,。

c) 單向閥堵塞，造成系統(tǒng)壓力不穩(wěn),，從而產(chǎn)生鬼峰,。早期島津的液相單向閥貌似不能用純乙腈作為流動相，現(xiàn)在應(yīng)該已經(jīng)得到改進,。

情況梳理二1,、 在線脫氣機脫氣不*,。

2,、 兩種流動相的有機相比例相差太大。例如A為100%水,，B為100%乙腈,。在梯度條件允許的情況下盡量減少兩中流動相之間的差距，降低空氣在兩中流動相中溶解度的差異,，從而減少氣泡的產(chǎn)生,。

3、 流動相配置好后預(yù)先超聲脫氣,。

情況梳理三

1,、流動相配置過程中受到污染

a) 盛放流動相的容器或是量具受到污染。

這種污染可能來自于洗滌劑,、鉻酸洗液或是其他實驗人員用完后的殘留雜質(zhì),。流動相容器的清洗一般用干凈的水+有機溶劑涮洗就行，過多的清洗步驟反而可能造成二次污染,。有時流動相容器的塑料蓋碎片都有可能是雜質(zhì)的來源,。

b) pH計。

很多pH計以聚碳酸酯作為外殼，然而聚碳酸酯是可以溶于有機溶劑的,，所以盡量使用玻璃pH計來測量流動相的pH,。

c) 濾膜。

劣質(zhì)的或者型號錯誤的濾膜往往是鬼峰出現(xiàn)的原因,。

d) 放置時間過長,。

流動相在空氣中暴露時間過長，就可能吸收空氣中的有機雜質(zhì),，有時流動相中的添加劑,，例如TFA，時間長了會氧化從而產(chǎn)生雜質(zhì),。

2,、儀器樣品稀釋液與流動相極性或者pH相差太大。

這也是導(dǎo)致鬼峰的原因之一,，這種問題很有可能導(dǎo)致樣品分為兩個不同的階段出峰,，從而產(chǎn)生雙峰或者多峰。