色譜作為一種分離技術(shù)與方法,，自本世紀(jì)初起已經(jīng)有100多年的歷史了,，現(xiàn)在已經(jīng)成為分析化學(xué)學(xué)科中的一個(gè)重要的分支,。在人類進(jìn)入新時(shí)代之際，人們面臨著在信息科學(xué),、生命科學(xué),、材料科學(xué)、環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域的快速發(fā)展的挑戰(zhàn),，在這些領(lǐng)域人才的需求成為國(guó)家高度發(fā)展的至關(guān)重要的因素,。而色譜技術(shù)是生命科學(xué)、材料科學(xué),、環(huán)境科學(xué)*的手段和工具,。根據(jù)zui近的統(tǒng)計(jì)在*各類分析儀器中氣象色譜儀和液相色譜儀的營(yíng)銷(xiāo)總額占25%-30%。

　　科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,，使得色譜技術(shù)也得到進(jìn)一步的發(fā)展，不斷有新的聯(lián)用的技術(shù)得到應(yīng)用,。生物醫(yī)學(xué)的發(fā)展,，也不斷要求高靈敏和高選擇性的方法對(duì)研究的對(duì)象進(jìn)行定性和定量的研究。

　　1 色譜柱的相關(guān)性質(zhì)

　　1.1 色譜柱的定義：裝填有固定相用以分離混合組分的柱管,。多為金屬或玻璃制作,。有直管形、盤(pán)管形,、U形管等形狀,。

　　1.2 分類：色譜柱可分為填充柱和開(kāi)管柱兩大類。液相色譜通常均采用填充柱,。色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相,，以及色譜柱的制備和操作條件。簡(jiǎn)單而言：常見(jiàn)的分配住填料：碳十八柱（ODS/C18),、碳八柱（Octy了/C8）,、碳六柱（Hexyl/C6）、碳四柱（Butyl/C4）,、碳一注（Methyl/C1）,、陰離子交換柱（SAX)、陽(yáng)離子交換柱（SCX）,、苯基柱（Phenyl）,、氨基柱（Amino/NH2）、氰基柱（Cyano/CN/Nitrile）,。常見(jiàn)的吸附柱填料：硅膠柱

　　色譜柱的選擇會(huì)直接影響混合物中組分的分離,。舉例來(lái)講：對(duì)于填充柱而言,，可選擇的固定相較多，柱容量較大,，但是受柱長(zhǎng)的限制,，分離能力有限，主要應(yīng)用于簡(jiǎn)單化合物的分離,。

　　2 色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng)

　　2.1 色譜柱的維護(hù),。我們?cè)谑褂眯碌纳V柱應(yīng)該在我們自己的液相色譜儀上進(jìn)行性能測(cè)試，即使用色譜柱附帶的檢驗(yàn)報(bào)告上測(cè)試條件和樣品來(lái)測(cè)定該色譜柱的柱效,。并且,，在以后的使用中，應(yīng)時(shí)常對(duì)色譜柱進(jìn)行測(cè)試,。而且在使用的過(guò)程中常常有堵塞的現(xiàn)象,，造成這種現(xiàn)象的主要原因是①溶劑中的不溶物②樣品中的不溶物③泵進(jìn)樣器等中的不溶物④柱內(nèi)不溶物的形成等。如果當(dāng)色譜柱堵塞以后我們可以對(duì)色譜柱進(jìn)行修復(fù),，首先,，使用含鹽緩沖液后（如離子對(duì)試劑）應(yīng)用溶解性強(qiáng)的溶劑（如水）進(jìn)行沖洗。其次,，先斷開(kāi)檢測(cè)器,，然后用對(duì)來(lái)自樣品中的物質(zhì)有強(qiáng)溶解性的溶劑進(jìn)行沖洗，對(duì)于反相色譜柱,，可使用甲醇,、乙睛、四氫呋喃,、氯仿,、庚烷等，在此條件下,，應(yīng)避免溶劑的pH低于2或高于8,。zui后如果經(jīng)過(guò)上述還是沒(méi)有修復(fù)，色譜柱壓力還是沒(méi)有下降,，則要斷開(kāi)檢測(cè)器,，將色譜柱反方向放置，然后檢查柱壓,，若壓力穩(wěn)定下降,，則保持色譜柱反方向連接，用低于0.5 ml/min 流速?zèng)_洗一小時(shí),。如果壓力不下降,，則要看內(nèi)置過(guò)濾器是否被堵塞，如果被堵塞應(yīng)沖洗或更換,，若進(jìn)口端的填料發(fā)生堵塞,，柱子將不可能被*恢復(fù),，只能通過(guò)去掉進(jìn)口端的部分填料，重新填充進(jìn)行有限的柱效恢復(fù),。而且修復(fù)的厚度是2-5mm,。

　　2.2 色譜柱的保養(yǎng)。色譜柱在使用前,，進(jìn)行柱的性能測(cè)試,，并將結(jié)果保存起來(lái)，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考,。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品,、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同,；另外,，在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測(cè)試所使用的條件是*條件)，只有這樣,，測(cè)得的結(jié)果才有可比性,。我們?cè)趯?duì)色譜柱使用前進(jìn)行測(cè)試以后，我們要根據(jù)不同的情況對(duì)色譜柱進(jìn)行保養(yǎng)：①反相色譜柱每天實(shí)驗(yàn)后的保養(yǎng)：使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相,，實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘,，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘,。注意：不能用純水沖洗柱子，應(yīng)該在水中加入10%的甲醇,，防止將填料沖塌陷,。②長(zhǎng)期保存色譜柱：如色譜柱要長(zhǎng)時(shí)間保存，必須存于合適的溶劑下,。對(duì)于反相柱可以儲(chǔ)存于純甲醇或乙腈中,，正相柱可以儲(chǔ)存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲(chǔ)存于水（含防腐劑*或柳硫汞）中,，并將購(gòu)買(mǎi)新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上,。儲(chǔ)存的溫度是室溫。

　　概括起來(lái)就是：①柱子在任何情況下不能碰撞,、彎曲或強(qiáng)烈震動(dòng),；②當(dāng)柱子和色譜儀聯(lián)結(jié)時(shí)，閥件或管路一定要清洗干凈,；③要注意流動(dòng)相的脫氣,；④避免使用高粘度的溶劑作為流動(dòng)相；⑤進(jìn)樣樣品要提純,；⑥嚴(yán)格控制進(jìn)樣量,；⑦每天分析工作結(jié)束后,，要清洗進(jìn)樣閥中殘留的樣品；⑧每天分析測(cè)定結(jié)束后,，都要用適當(dāng)?shù)娜軇﹣?lái)清洗柱,；⑨若分析柱長(zhǎng)期不使用，應(yīng)用適當(dāng)有機(jī)溶劑保存并封閉,。

　　3 色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng)在高壓液相色譜中的應(yīng)用

　　液相色譜(HPLC)是20世紀(jì)60年代后期發(fā)展起來(lái)的分離分析技術(shù),，是現(xiàn)代分離測(cè)定的重要手段。問(wèn)世以來(lái),，因其具有分離效能高,、分析速度快、檢測(cè)靈敏度好,、能分析高沸點(diǎn)但不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué),、藥物及臨床分析。液相色譜柱是消耗品,，會(huì)隨使用時(shí)間或進(jìn)樣的次數(shù)增加,，出現(xiàn)色譜峰高降低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰,，柱效下降,。需要定期進(jìn)行*清洗和再生，不同的色譜柱清洗方法各不相同比如：

　　3.1 反相柱 分別用甲醇:水=90:10,，純甲醇（HPLC級(jí)）,，異丙醇（HPLC級(jí)），二氯甲烷（HPLC級(jí)）等溶劑作為流動(dòng)相,，依次沖洗,，每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的色譜柱體積.然后再以相反的次序沖洗。

　　3.2 正相柱 分別用正己烷（HPLC級(jí)）,，異丙醇（HPLC級(jí)）,，二氯甲烷（HPLC級(jí)），甲醇（HPLC級(jí)）等溶劑做流動(dòng)相,，順次沖洗,，每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的柱體積(異丙醇粘度大，可降低流速,，避免壓力過(guò)高).注意使用溶劑的次序不要顛倒,，用甲醇沖洗完后，再以相反的次序沖洗至正己烷,，所有的流動(dòng)相必須嚴(yán)格脫水,。

　　3.3 離子交換柱 長(zhǎng)時(shí)間在緩沖溶液中使用和進(jìn)樣，將導(dǎo)致色譜柱離子交換能力下降,，用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽(yáng)離子柱再生,，反之,，用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。

　　另外,，還可以選擇能溶解柱內(nèi)污染物的溶劑為流動(dòng)相做正方向和反方向沖洗,。但再生后的色譜柱柱效是不可能恢復(fù)到新柱的水平的.如果柱子裝反了，可以調(diào)回來(lái),，但可能會(huì)造成柱內(nèi)擔(dān)體塌陷.在不得已的情況下盡量不要反裝色譜柱,。

　　加強(qiáng)色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng)對(duì)于色譜柱高壓液相色譜中應(yīng)用有著重要的意義，制定色譜柱管理的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程并嚴(yán)格執(zhí)行,。每一根新購(gòu)進(jìn)的色譜柱必須造冊(cè)登記,，內(nèi)容包括：生產(chǎn)公司、品名,、型號(hào),、規(guī)格、購(gòu)進(jìn)時(shí)間,、啟用時(shí)間,、單價(jià)、柱內(nèi)保護(hù)溶液等,。色譜柱分類存放,，硅膠柱、化學(xué)鍵合硅膠柱,、氰基或氨基柱,、離子交換樹(shù)脂柱、凝膠柱各用一個(gè)色譜柱盒,，盒上貼上標(biāo)簽,，注明類別。隨柱說(shuō)明書(shū)裝入密實(shí)袋附在登記本上,。每啟用一根色譜柱,，在色譜柱上貼上標(biāo)簽,，注明啟用日期,。每根柱子每?jī)蓚€(gè)月保養(yǎng)一次，特別是對(duì)于一些使用頻率少的柱子,，因?yàn)榉胖脮r(shí)間長(zhǎng),，容易干柱，每一次做好保養(yǎng)記錄,。對(duì)于確已失效的柱子,，做好停用記錄，不能隨意丟棄,，專門(mén)存放,，如果現(xiàn)用的柱子的填料需要填補(bǔ),，可以用存放的柱子的填料。在從事生產(chǎn)的單位的質(zhì)檢部門(mén),，對(duì)于使用時(shí)間較長(zhǎng)柱效降低的柱子,，可把它用于檢測(cè)產(chǎn)品的中間體。

　　加強(qiáng)色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng)對(duì)于高壓液相色譜的發(fā)展有著重要的意義,，高壓液相色譜系統(tǒng)其中就包括色譜柱,，因此，加強(qiáng)色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng)有利于高壓液相色譜的發(fā)展,，推動(dòng)我國(guó)的醫(yī)療事業(yè)的發(fā)展,。