今天就告訴您可以使ELISA試劑盒更加出色的三個方法。

• 試劑準備

按ELISA試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑,。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的,，應為新鮮的和高質(zhì)量的,。自配的緩沖液應用pH計測量較正。從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用,。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存,。

• 洗滌

洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟，但卻也決定著實驗的成敗,。ELISA試劑盒就是靠洗滌來達到分離游離的和結(jié)合的酶標記物的目的,。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì),。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,，而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。可以說在ELISA操作中,，洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),，應引起操作者的高度重視，操作者應嚴格按要求洗滌,，不得馬虎,。

三、保溫

在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應,，即加標本和加酶結(jié)合物后,。抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間,，這一保溫過程稱為溫育（incubation）,，有人稱之為孵育，在ELISA中似不恰當,。ELISA屬固相免疫測定,，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生,。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標本,，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機會,，只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程,，因此需經(jīng)擴散才能達到反應的終點,。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。這就是為什么ELISA反應總是需要一定時間的溫育,。溫育常采用的溫度有43℃,、37℃、室溫和4℃（冰箱溫度）等,。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。ELISA試劑盒在建立ELISA方法作反應動力學研究時,，實驗表明,，兩次抗原抗體反應一般在37℃經(jīng)1-2小時，產(chǎn)物的生成可達,。為加速反應,，可提高反應的溫度，有些試驗在43℃進行,，但不宜采用更高的溫度,。抗原抗體反應4℃更為*，在放射免疫測定中多使反應在冰箱中放置一晚,，以形成zui多的沉淀,。但因所需時間太長，在ELISA中一般不予采用,。
保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外,，一般均采用水浴，可將ELISA板置于水浴箱中,，ELISA板底應貼著水面,，使溫度迅速平衡。為避免蒸發(fā),，板上應加蓋,，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此時可讓反應板漂浮在水面上,。若用保溫箱,，ELISA板應放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等,，在盒底墊濕的紗布,，zui后將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規(guī)定的溫度,，特別是在氣溫較低的時候更應如此,。無論是水浴還是濕盒溫育，反應板均不宜疊放,，以保證各板的溫度都能迅速平衡,。室溫溫育的反應，操作時的室溫應嚴格限制在規(guī)定的范圍內(nèi),，標準室溫溫度是指20-25℃,，但具體操作時可根據(jù)說明書的要求控制溫育。室溫溫育時,，ELISA板只要平置于操作臺上即可,。應注意溫育的溫度和時間應按規(guī)定力求準確。為保證這一點,，一個人操作時,，一次不宜多于兩塊板同時測定。

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