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蛋白質(zhì)濃度測定是利用化學或物理方法測定蛋白質(zhì)濃度,，一般蛋白濃度測定的方法有很多種,，每種方法都有優(yōu)點和局限性,，下面我們就具體看一下蛋白濃度測定的方法都有哪些。

蛋白濃度測定的方法：

1. 紫外分光光度法

紫外光譜吸收法測定蛋白質(zhì)含量是講蛋白質(zhì)溶液直接在紫外分光光度計中測定的方法,，不需要任何試劑,，操作簡單且易回收。蛋白質(zhì)溶液在280nm附近有強烈的吸收,，這是由于蛋白質(zhì)中酪氨酸,、色氨酸殘基而引起的，所以光密度受這兩種氨基酸含量的支配,。另外核蛋白或提取過程中雜有的核酸對測定結果引起極大誤差,，其zui大吸收在260nm。所以同時測定280及260nm兩種波長的吸光度,，通過計算可得較為正確的蛋白質(zhì)含量,。

2. 雙縮脲法

利用半飽和硫酸銨或27.8％硫酸鈉——亞硫酸鈉可使血清球蛋白沉淀下來，而此時血清白蛋白仍處于溶解狀態(tài)，因此可把兩者分開,，這種利用不同濃度的中性鹽分離蛋白的方法稱為鹽方法,。鹽析分離蛋白質(zhì)的方法不僅用于臨床醫(yī)學，而且還廣泛地用于生物化學研究工作中,，如一些特殊蛋白質(zhì)—酶,、蛋白激素等的分離和純化。

蛋白質(zhì)和雙縮脲一樣,，在堿性溶液中能與銅離子形成紫色絡合物（雙縮脲反應）,，且其呈色深淺與蛋白質(zhì)的含量成正比，因此可于蛋白質(zhì)的定量測定,。

但必須注意,，此反應并非蛋白質(zhì)所*，凡分子內(nèi)有兩個或兩個以上的肽鍵的化合物以及分子內(nèi)有—CH2—NH2等結構化合物,，雙縮脲反應也呈陽性,。本實驗用27.8％硫酸鈉—亞硫酸鈉溶液稀釋血清，取出一部分用雙縮脲反應測定蛋白質(zhì)的含量,，剩余部分則用濾紙過濾,，使析出的球蛋白與白蛋白分離，取出濾液用同一反應測定白蛋白的含量,。總蛋白與白蛋白含量之差即球蛋白的含量,。白蛋白與球蛋白之比即所謂的白／球比值,。

3. Folin-酚試劑法

目前實驗室較多用Folin-酚法測定蛋白質(zhì)含量，此法的特點是靈敏度高,，較雙縮脲高兩個數(shù)量級,，較紫外法略高，操作稍微麻煩,，反應約在15分鐘有zui大顯色,，并zui少可穩(wěn)定幾個小時，其不足之處是干擾因素較多,，有較多種類的物質(zhì)都會影響測定結果的準確性,。其原理是蛋白質(zhì)中含有酚基的酪氨酸，可與酚試劑中的磷鉬鎢酸作用產(chǎn)生蘭色化合物,，顏色深淺與蛋白含量成正比,。

4. 考馬氏亮藍G-250

此方法是1976年Bradform建立。染料結合法測定蛋白質(zhì)的優(yōu)點是靈敏度較高,，可檢測到微量蛋白,，操作簡便、快迅，試劑配制極簡單,，重復性好,，但干擾因素多?？捡R氏亮藍G－250具有紅色和青色兩種色調(diào),、在酸性溶液中游離狀度下為棕紅色，當它通過疏水作用與蛋白質(zhì)結合后,，變成藍色,，zui大吸收波長從465nm轉(zhuǎn)移到595nm處，在一定的范圍內(nèi),，蛋白質(zhì)含量與 595nm的吸光度成正比,，測定595nm處光密度值的增加即可進行蛋白質(zhì)的定量。

以上便是實驗室中常見的幾種蛋白濃度測定的方法,，另外還有凱氏定氮法和BCA法,，有凱氏定氮法結果zui，但操作復雜,，BCA法又以其試劑穩(wěn)定,，抗*力較強，結果穩(wěn)定,，靈敏度高而受到歡迎,。