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細胞保種心得

來源:上海子實生物科技有限公司   2017年03月01日 13:19  

細胞采購的運輸形式一般分為兩種,一種是直接寄送凍存細胞,,一種是復蘇后寄送活細胞。前者是由液氮中取出細胞凍存管,采用干冰運輸,;后者是將細胞復蘇至T-25培養(yǎng)瓶中,,采用常溫運輸。兩者各有優(yōu)缺點,,*種方式的優(yōu)點是可以長途運輸,,因為細胞在干冰中相對穩(wěn)定,一般可以保證數(shù)周之內(nèi)不影響細胞活性,,但缺點是運輸成本高,,且細胞復蘇是很復雜的過程,如果細胞復蘇后狀態(tài)不佳,,則很難界定是來源的問題還是復蘇操作的問題,;而第二種方式的優(yōu)點是細胞收到后可以直接通過觀察來大體了解細胞狀態(tài),并且對運輸?shù)囊笙鄬^低,,缺點則是只適合短途運輸,,因為即便運輸時培養(yǎng)基中不添加血清,細胞還是會不斷增殖,,當細胞長滿后,,細胞的狀態(tài)會隨時間的增加而不斷變差。綜上,,如果是從國外大型細胞庫采購,,一般采用*種方法,既能適應長途運輸,,且大型細胞庫的凍存細胞質(zhì)量普遍較好,,在良好的操作下復蘇成活率很高;如果是從國內(nèi)細胞庫采購,,則一般采用第二種方法,,方便收到細胞時能較好掌握細胞狀態(tài),并且降低運輸成本(即采購成本),。我們所大部分細胞還是從國內(nèi)的細胞所(如子實生物)采購,,一來質(zhì)量有保證,二來又能降低采購的時間和成本,;當然一些大課題還是從國外細胞庫購買細胞,,這樣做出的成果更能獲得學術(shù)界的認可。    接下來分別針對兩種運輸方式來談下對新細胞的處理過程,。       對于直接寄送凍存細胞的情況,,首先要檢查的就是細胞收到后是否有足量剩余干冰,如果干冰不足,,或是已經(jīng)沒有干冰,,則細胞狀態(tài)可能會收到影響,建議盡快復蘇,;如果有足量干冰,,建議先轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱,,于第二天按正常流程復蘇,即37℃水浴鍋中快速融解,,低速離心后去除含DMSO的凍存液,,換入適合細胞的新鮮培養(yǎng)基,輕柔吹勻后轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中,,補足培養(yǎng)基,;一般貼壁細胞在24h內(nèi)即可觀察到細胞貼壁,從而判斷細胞狀態(tài),,懸浮細胞則復蘇后即可觀察細胞狀態(tài),。對于凍存時間較長的細胞,可能需要傳代1到2次后,,細胞才會調(diào)整到正常狀態(tài),,所以細胞復蘇后如果狀態(tài)不佳,不要灰心,,仍要細心培養(yǎng),。       對于復蘇后寄送活細胞的情況,則細胞收到后要先檢查細胞瓶是否有破損,,因為一般國內(nèi)細胞寄送都走的普通快遞,,快遞質(zhì)量魚龍混雜,細胞瓶在運輸中很有可能受到碰撞和擠壓,,導致瓶體受損,。如果發(fā)現(xiàn)細胞瓶受損,則需要盡快處理,,該棄就棄,。如果細胞瓶完好,則用酒精消毒瓶身,,去除封口膜,,然后置于37℃培養(yǎng)箱中靜置1-2h。待細胞穩(wěn)定后,,觀察細胞狀態(tài),,并及時記錄,因為很多國內(nèi)細胞庫都是可以反饋細胞狀態(tài)的,,如果收到時細胞狀態(tài)不佳甚至污染,是可以要求重新寄送的,。細胞如沒有異常,,則盡快傳代并更換適合細胞的新鮮培養(yǎng)基。由于新細胞一般都是*次接觸,,細胞傳代過程中尤為需要注意胰酶消化時間,,消化時間過短或過長都會影響細胞狀態(tài),,甚至導致細胞死亡。建議大家采用低濃度胰酶消化,,消化時縮短放培養(yǎng)箱和觀察的間隔時間,,以便盡可能找到合適的消化時間。        當然,,細胞培養(yǎng)是很辛苦的事,,整個細胞處理過程中都需要保證嚴格的無菌操作,包括對一些實驗細節(jié),,都要小心細心,,才能把細胞養(yǎng)好。希望以上能對大家有所幫助,。  上海子實生物科技有限公司

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