液相色譜柱后衍生化法用于氨基甲酸酯類農(nóng)藥的測(cè)定

    提要研究了用液相色譜(HPLC)柱后衍生化熒光檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定氨基甲酸酯類農(nóng)藥的方法。用RadialPakC18柱在不同流動(dòng)相梯度條件下對(duì)六種農(nóng)藥和三種代謝產(chǎn)物進(jìn)行分離,，通過柱后衍生化技術(shù)提高熒光檢測(cè)器的靈敏度。結(jié)果表明：該方法分離效果良好，低檢測(cè)濃度為2mg/l,，小檢出量為2ng。

　　1,、前言

　　氨基甲酸酯農(nóng)藥種類多,，用量大，需建立一種選擇性強(qiáng)而又靈敏,、簡(jiǎn)便的多殘留測(cè)定方法,。常規(guī)的氣相及液相色譜測(cè)定法分別具有前處理繁瑣費(fèi)時(shí)和檢測(cè)靈敏度不高等問題，均難以適應(yīng)對(duì)環(huán)境中微量殘留農(nóng)藥快速分析的要求,。本文研究的是應(yīng)用HPLC柱后衍生化熒光檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定的方法,。該方法國(guó)外已有一些研究，而國(guó)內(nèi)尚未見報(bào)道,。

　　本方法的建立是基于氨基甲酸酯類農(nóng)藥在結(jié)構(gòu)上均帶有甲胺基團(tuán)(-NHCH3),，在堿液作用下都可水解產(chǎn)生甲胺這一特性。在HPLC的色譜柱與檢測(cè)器間加一柱后反應(yīng)裝置,，農(nóng)藥及其代謝物先經(jīng)徑向加壓柱分離,，再在裝置內(nèi)堿解產(chǎn)生甲胺，甲胺與衍生化試劑反應(yīng)可生成一種強(qiáng)熒光物質(zhì)1-(2-羥乙基)硫基-2-甲基異吲哚,，用高靈敏的熒光檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)即可,。其反應(yīng)式如下面所示。

　　2,、實(shí)驗(yàn)部分

　　2.1 儀器與試劑

　　儀器：德世AGR1100液相色譜儀+熒光檢測(cè)器,， 自動(dòng)梯度控制器，1100高壓恒流泵,，S3100進(jìn)樣器,，色譜工作站以及溫度控制器、柱后反應(yīng)裝置,、Z型徑向加壓器,，柱為RadialPakmBondaPakC18徑向加壓柱。

　　試劑氧氫化鈉,，優(yōu)級(jí)純,；四硼酸鈉、鄰苯二甲醛(OPTA)，分析純,；巰基乙醇(MERC),，化學(xué)純；甲醇,，分析純,，重蒸過濾；超純水,，過濾備用,。

　　農(nóng)藥標(biāo)樣涕滅威，涕滅威砜,，涕滅威亞砜,，呋喃丹，3-OH呋喃丹,，西維因,，速滅威，葉蟬散,，巴沙等,。

　　2.2 試驗(yàn)方法

　　2.2.1 試液配制

　　OPTA-MERC稱19.1g四硼酸鈉溶于約800ml超純水中，另稱0.1g鄰苯二甲醛溶于10ml甲醇中,。緩慢將鄰苯二甲醛溶液滴加到硼砂溶液中,，邊加邊搖動(dòng)。在通風(fēng)櫥內(nèi)加50mL巰基乙醇于混合液中,，搖勻后用超純水稀釋到1000ml,，使四硼酸鈉溶液濃度為0.05mol/L。用0.45mm濾膜過濾,，冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>

　　NaOH溶液稱2.0gNaOH溶于1000ml超純水中,，使其濃度為0.05mol/L,。用0.45mm濾膜過濾備用,。農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)液準(zhǔn)確稱取0.01g各種農(nóng)藥純品分別置于100ml容量瓶中，其中涕滅威,、涕滅威砜,、涕滅威亞砜、呋喃丹,、3-OH呋喃丹和速滅威用超純水溶解定容,，西維因、葉蟬散,、巴沙用甲醇定容,，使各農(nóng)藥溶液的濃度為100mg/L。再分別用超純水稀釋成一定濃度直接進(jìn)樣測(cè)定(環(huán)境水樣用0.45mm濾膜過濾后直接進(jìn)樣測(cè)定。該濾膜具有濾速快,、不易吸附的特點(diǎn),，樣品過濾后濃度不變)。

　　2.2.2 分析條件

　　流動(dòng)相：甲醇-水,，流速1ml/min,；OPTA-MERC、NaOH泵流速均為0.5ml/min,；熒光檢測(cè)器Excitation338nm,，Emission455NM，靈敏度1/64,；柱后反應(yīng)溫度95±0.2℃,；記錄儀紙速0.5cm/min；用外標(biāo)法定量,，進(jìn)樣量1ml,。

　　3、結(jié)果和討論

　　3.1 農(nóng)藥的分離及反應(yīng)條件的選擇

　　按照上述儀器條件,，對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行了選擇,。用甲醇/水固定比例的流動(dòng)相進(jìn)行分離時(shí)，六種農(nóng)藥和三種代謝物在RadialPakiC18柱上得不到很好的分離,，而用甲醇-水以一定程序進(jìn)行梯度洗脫后得到了較好的分離效果,。在此基礎(chǔ)上若將其中的甲醇改為甲醇：乙腈=80：20(V/V)的混合液后再與水進(jìn)行梯度淋洗，則分離效果更好,，涕滅威的兩個(gè)代謝產(chǎn)物可得到*分離,。

　　本試驗(yàn)中衍生化試劑OPTA-METC及NaOH的濃度對(duì)檢測(cè)也有較大影響。適宜的濃度：OPTA為0.1-0.2g/L,，MERC為50mL/L,，NaOH為0.05mol/L。濃度過高不僅不能增加靈敏度,，反而會(huì)使背景噪音加大而干擾測(cè)定,。試劑配制后的使用期均不宜超過一周。

　　3.2 方法的靈敏度與線性關(guān)系

　　在上述試驗(yàn)條件下,，本方法的低檢出濃度為2mg/L,，低檢出量為2ng。圖3為進(jìn)樣量1ml時(shí)農(nóng)藥的低檢測(cè)圖譜,。

　　將供試農(nóng)藥標(biāo)液分別用超純水稀釋成2,、4、6,、8,、10,、12mg/L的溶液，測(cè)得的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系均良好,。

　　3.3 土壤中氨基甲酸酯農(nóng)藥的測(cè)定

　　分別稱取風(fēng)干,、過20目篩的土樣10g，添加一定濃度的農(nóng)藥標(biāo)液,，加10ml超純水振蕩提取,，離心，取上清液用0.45mm濾膜過濾后進(jìn)樣測(cè)定,。每種濃度做三組平行試驗(yàn),，結(jié)果涕滅威、涕滅威砜和呋喃丹同樣得到很好的分離,?；厥章蕿?/span>84.0-96.2%。

　　4,、結(jié)論

　　以上試驗(yàn)表明,，用HPLC柱后衍生化法測(cè)定多殘留的氨基甲酸酯農(nóng)藥具有簡(jiǎn)便、快速,、靈敏的特點(diǎn),，尤其適用于地下水和地表水中微量農(nóng)藥的檢測(cè)。由于該方法的進(jìn)樣量較大,，易造成色譜柱污染堵塞,，因此在實(shí)際檢測(cè)時(shí)在柱前加一預(yù)保護(hù)柱以延長(zhǎng)柱的使用壽命。