50%溶血試驗(yàn)即求得能使50%致敏羊紅細(xì)胞發(fā)生溶血的zui小量血清,，然后計(jì)算出每毫升血清中補(bǔ)體含量,。

以補(bǔ)體量作為橫坐標(biāo)，溶血百分?jǐn)?shù)作為縱坐標(biāo),，可得到一個(gè)清晰的“S”形曲線,。在50%溶血周圍，線段近似一條直線,。因此當(dāng)補(bǔ)體用量稍有變動(dòng),，就可對(duì)溶血程度發(fā)生很大影響。所以用50%溶血作為終點(diǎn)要比100%溶血更為敏感,。

50%溶血試驗(yàn)定血清中補(bǔ)體含量用以下公式表示：每毫升血清中補(bǔ)體含量（單位）=（1/血清用量）×稀釋倍數(shù),。

該公式可以從Von Krogh 方程式進(jìn)一步加以論證：x=k[1/（1-y）]^1/n。假定X=加入的新鮮血清量,，y=溶血的百分率,，以小數(shù)表示，V=斜率,，k=常數(shù),，轉(zhuǎn)變成對(duì)數(shù)，上述公式就變成：logx=logk+1/n log[y/（1-y）],，當(dāng)以50%溶血作為終點(diǎn)時(shí),，y/（1-y）=0.5/（1-0.5）=1，代入上述公式,，log x=log k+1/n log1,，由于-log1=0，log x=log k,，x=k,，也即表示補(bǔ)體的50%溶血單位k就是加入的新鮮血清量。

材料及器材

1,、稀釋液（磷酸鹽緩沖生理鹽水）：

使用時(shí)取此原液50ml,，加90ml蒸餾水,，經(jīng)高壓滅菌后即可使用。加入100%硫酸鎂溶液1ml,，可增強(qiáng)補(bǔ)體的效能,；

2、綿羊紅細(xì)胞懸液（1×10g/ml）,；

3,、溶血素（2U）；

4,、被檢血清（新鮮豚鼠血清）,；

5、水平離心機(jī),；

6,、水浴箱；

7,、721型分光光度計(jì),。

方法

1、濃度為1×10g/ml的綿羊紅細(xì)胞配制 取經(jīng)稀釋洗滌后的綿羊紅細(xì)胞配成較5%稍濃的細(xì)胞懸液,。取50%細(xì)胞懸液1ml,，加于14ml蒸餾水中測(cè) O.D值為DI按下式求出于一定體積的5%細(xì)胞懸液中應(yīng)加入稀釋液的毫升數(shù)。

Vf=Vi（Di-Ds）/Ds,，Vi為配制的50%細(xì)胞懸液體積,，Vf為于一定量5%細(xì)胞懸液中應(yīng)加入稀釋的ml數(shù)Ds為已知標(biāo)準(zhǔn)化的1×100個(gè)細(xì)胞/ml懸液的OD₅₄₀值-0.385。

2,、致敏綿羊細(xì)胞 取綿羊紅細(xì)胞懸液（1×102/ml）加等量的溶血素（2U/ml）,。充分混合,。置37℃水浴中作用30分鐘,，每隔10分鐘搖動(dòng)一次以免細(xì)胞下降即成5×108/ml致敏羊紅細(xì)胞。

3,、補(bǔ)體CH50單位測(cè)定

（1）按下表加樣,；

（2）將各管充分混合，置37℃水浴中60分鐘（搖動(dòng)1～2次,，以免紅細(xì)胞下沉）,；

（3）從水浴中取出后，立即將各管以2000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,，將各管上清液分別移于另一試管,；

（4）測(cè)定各管上清液OD值（波長(zhǎng)＝540nm）。

4,、補(bǔ)體CH50單位的計(jì)算 從測(cè)定管（第1～5管）及溶血對(duì)照管（第6管）的OD值中減去紅細(xì)胞對(duì)照管（第7管）的OD值,。再減去按待測(cè)血清每管實(shí)際用量計(jì)算出的血清色度OD值（80/800ⅹ該管實(shí)際量ⅹ第8管OD值）,。即為測(cè)定管的校正OD值。然后計(jì)算各測(cè)定管的溶血率（y值）,，再計(jì)算各管的y/（1-y）值,。在雙對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上，以y/（1-y）值為橫坐標(biāo),，血清用量為縱坐標(biāo),，得到一條直線。由于50%溶血（y=0.5）的y/（1─y）值等于1,。即可由橫坐標(biāo)等于1的一點(diǎn),，在直線上求得在縱坐標(biāo)上相應(yīng)的截距，此即產(chǎn)生50%溶血的待測(cè)血清實(shí)際用量,。zui后,，按下列公式計(jì)算出每毫升待測(cè)血清的總補(bǔ)體活性，以單位/毫升表示之,。