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豬內(nèi)毒素(ET)elisa試劑盒說明書

來源:上海將來實業(yè)股份有限公司   2010年11月26日 10:32  

本公司專業(yè)供應(yīng)Elisa試劑盒,*,,*,,可免費提供代測服務(wù),咨詢,!

公司主頁:www.laibio.com,、 www.jl-bio.com www.shjlsw.com,。

本試劑盒只能用于科學(xué)研究,,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

 

豬內(nèi)毒素(ET定量檢測試劑盒(ELISA

使用說明書

                                                      

【豬內(nèi)毒素(ETElisa試劑盒試劑盒名稱】

內(nèi)毒素(ET)定量檢測試劑盒(ELISA

【豬內(nèi)毒素(ETElisa試劑盒試劑盒用途

定量檢測豬血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中內(nèi)毒素(ET的含量,。

【豬內(nèi)毒素(ETElisa試劑盒檢測原理

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標(biāo)準(zhǔn)品,、待測樣本加入到預(yù)先包被內(nèi)毒素(ET單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中,,溫育足夠時間后,洗滌除去未結(jié)合的成分,,再加入酶標(biāo)工作液,,溫育足夠時間后,洗滌除去未結(jié)合的成分,。依次加入底物A,、B,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍色產(chǎn)物,,在酸的作用下變成黃色,,顏色的深淺與樣品中內(nèi)毒素(ET)濃度呈正相關(guān),450nm波長下測定OD值,,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值,,計算樣本中內(nèi)毒素(ET含量。

【豬內(nèi)毒素(ETElisa試劑盒試劑盒組成

1

酶標(biāo)包被板

12×8

7

顯色劑A

6mL

2

標(biāo)準(zhǔn)品

0.3mL×6

8

顯色劑B

6mL

3

20倍濃縮洗滌液

25mL

9

終止液

6mL

4

樣本稀釋液

6mL

10

說明書

1

5

特殊稀釋液

6mL

11

封板膜

2

6

酶標(biāo)試劑

6mL

12

密封袋

1

備注:標(biāo)準(zhǔn)品(16號)濃度依次為:1,、0.5,、0.250.125,、0.0625,、0.0312 EU/mL.

 

【豬內(nèi)毒素(ETElisa試劑盒需要而未提供的試劑和器材

137恒溫箱

2,、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

3,、精密移液器及一次性吸頭

4、蒸餾水

5,、一次性試管

6,、吸水紙

【豬內(nèi)毒素(ETElisa試劑盒操作步驟】

1,、準(zhǔn)備:從冰箱取出試劑盒,室溫復(fù)溫平衡30分鐘,。

2,、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

3,、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本:取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板,,固定于框架上,分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔,、待測樣本孔和空白對照孔,,記錄各孔位置,在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL,;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加,。

4,、溫育:37水浴鍋或恒溫箱溫育30min

5,、洗板:棄去液體,,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,,靜置1min,,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板),。

6、加酶標(biāo)工作液:每孔加入酶標(biāo)工作液50μL,,空白對照孔不加,。

7、溫育:37水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。

8、洗板:棄去液體,,吸水紙上拍干,,每孔加滿洗滌液,靜置1min,,甩去洗滌液,,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板),。

9,、顯色:每孔先加入顯色劑A 50μL,,再加入顯色劑B 50μL,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),,37避光顯色15min,。

10、終止:取出酶標(biāo)板,,每孔加終止液50μL,,終止反應(yīng)(顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

11,、測定:以空白孔調(diào)零,,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值),。

12,、計算:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值,計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,,再根據(jù)樣本的OD值,,在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度,也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算,。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù),。

【豬內(nèi)毒素(ETElisa試劑盒樣本要求】

1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3,,因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑,。

2、標(biāo)本采集后盡早進行提取,,提取按相關(guān)文獻進行,,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能立即試驗,,可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3,、樣本應(yīng)充分離心,,不得有溶血及顆粒。

【豬內(nèi)毒素(ETElisa試劑盒注意事項】

1,、實驗嚴(yán)格按照說明書的操作進行,,實驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

2,、酶標(biāo)包被板開封后如未用完,,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

3,、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本和空白對照都做雙份檢測,,取平均值,以減小實驗誤差,。

4,、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,計算結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度,。

5,、本試劑盒定量范圍為0.0312-1 EU/mL,超過此范圍,,為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計算所得,,不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果,請用特殊稀釋液稀釋后測定準(zhǔn)確結(jié)果(0.0312-1 EU/mL范圍內(nèi)),,乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度,。

6、若顯色過淺,,可適當(dāng)延長底物溫育時間,。

7、為避免交叉污染,,標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標(biāo)工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分,,要懸臂加樣,不得碰到微孔,;不得重復(fù)使用封板膜,。

8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,,不同批號的試劑不得混用,。

9、底物B對光敏感,,避免長時間暴露于光下,。

 

【豬內(nèi)毒素(ETElisa試劑盒操作程序總結(jié)】

 

準(zhǔn)備試劑,樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

 


 

加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,,37反應(yīng)30分鐘

 

洗板4次,,加入酶標(biāo)試劑,37反應(yīng)30分鐘

 

洗板4次,,加入顯色液A,、B,,37顯色15分鐘

 

加入終止液

 

15分鐘之內(nèi)讀OD

 

計算

 

【豬內(nèi)毒素(ETElisa試劑盒檢測范圍

0.0312 EU/mL - 1 EU/mL

【豬內(nèi)毒素(ETElisa試劑盒規(guī)格】

96人份/

【豬內(nèi)毒素(ETElisa試劑盒貯藏】

2-8,,避光防潮保存,。

【豬內(nèi)毒素(ETElisa試劑盒有效期】

6個月

 本公司為國內(nèi)試劑盒供應(yīng)商之一,質(zhì)量保證,。

,!公司主頁:http://www.shjlsw.com

 

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