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食品中農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)

來(lái)源:上海邁哲電子科技有限公司   2010年11月17日 09:26  

一、樣品處理技術(shù)

食品中農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)水平不僅依賴于檢測(cè)儀器設(shè)備,,同時(shí)決定于樣品處理水平,樣品處理在農(nóng)藥殘留檢測(cè)中具有重要地位,。

1. 食品中農(nóng)藥殘留提取方法

食品農(nóng)藥殘留檢測(cè)中,根據(jù)樣品不同采用的提取方法有:浸漬法,、漂洗法,、振蕩法、消化法、超聲波萃取法,、-索氏提取法及高速均質(zhì)法等,。

浸漬法、漂洗法,、振蕩法樣品處理時(shí)間較長(zhǎng),,且回收率相對(duì)不高,已不太常用,。消化法需加入消化劑并加熱處理,,易使部分農(nóng)藥分解,故不常用,。

索氏提取法:為經(jīng)典提取方法,,其方法是將破碎樣品預(yù)先包好放入索氏提取器中,在圓底燒瓶中加入提取劑(有機(jī)溶劑),,加熱使索氏提取劑揮發(fā)并在索氏提取中冷凝下來(lái),,浸泡提取樣品,使其農(nóng)藥殘留物等浸出,。當(dāng)提取液達(dá)到一定高度自動(dòng)流回到圓底燒瓶中,,如此連續(xù)提取數(shù)小時(shí),提取效果好,,是上的標(biāo)準(zhǔn)方法,。但樣品處理時(shí)間太長(zhǎng),干擾物質(zhì)較多,,不適用于多殘留快速檢測(cè)。

超聲波提取法,,將樣品粉碎后加入提取劑,,在超聲波儀上提取5min15min。該方法具有提取效果好,,時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn),,已普遍采用。

高速均質(zhì)提取法:將切碎的樣品加入提取劑在高速均質(zhì)機(jī)上均質(zhì)數(shù)分鐘,,在樣品極細(xì)顆粒狀態(tài)下萃取農(nóng)藥殘留,。此方法簡(jiǎn)便、快速且提取效果好,,為美國(guó),、歐洲及我國(guó)農(nóng)藥殘留檢測(cè)普遍采用的方法。

2. 提取液凈化方法

常用凈化方法有:液-液分配法,、吸附柱層析法,、磺化法、凝結(jié)沉淀法、冷凍法,、固相萃取凈化法,、凝膠色譜凈化法等。

固相萃取凈化技術(shù)(SPE):通過流動(dòng)相中樣品的不同組分在固定相上吸附能力的不同有選擇地將農(nóng)藥殘留物吸附,,然后再選擇適當(dāng)溶劑將其洗脫,,從而達(dá)到提取、凈化的目的,。它可以將樣品萃取,、凈化,而且可以將所需樣濃縮,。因此更適用于微量,、痕量農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。

凝膠滲透色譜純化系統(tǒng)(GPC):適用于凈化大分子物質(zhì),。GPC凈化系統(tǒng)主要用于水果,、奶類、蔬菜,、糧食,、肉類、茶葉,、煙草,、食用油的農(nóng)殘樣品處理凈化。

二,、食品中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法

1. 食品中農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法

(1) 免疫檢測(cè)技術(shù)

用于農(nóng)藥殘留的免疫檢測(cè)技術(shù)有放射免疫分析(RIA)和酶免疫分析(EIA)兩種,。兩種技術(shù)基本原理相同,即抗原與抗體反應(yīng)形成抗原抗體復(fù)合物,。RIA技術(shù)以放射性同位素作指示劑,,然后用γ射線探測(cè)儀或閃爍計(jì)數(shù)器測(cè)定γ射線或β射線的放射強(qiáng)度。而在EIA技術(shù)中,,用生物酶作標(biāo)記物,。酶與底物發(fā)生特異性反應(yīng),生成的產(chǎn)物與另一種物質(zhì)產(chǎn)生顏色反應(yīng)或使紫外吸光值發(fā)生改變,,用分光光度計(jì)測(cè)定底物液吸光值變化推算出被測(cè)物濃度,。

RIA由于使用放射性物質(zhì),檢測(cè)設(shè)備昂貴且需要防輻射設(shè)備,,并且需要專業(yè)技術(shù)人員操作,,應(yīng)用前景受到一定限制。EIA技術(shù)相對(duì)RIA技術(shù)具有靈敏度高,,特異性強(qiáng),,成本低,簡(jiǎn)便快捷,,自動(dòng)化程度高,檢測(cè)方法多樣并且安全等優(yōu)點(diǎn)。EIA技術(shù),,尤其是酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(ELISA),已成為目前使用zui普及的免疫分析技術(shù),。

我國(guó)20世紀(jì)90年代開始農(nóng)藥免疫檢測(cè)技術(shù)研究,,主要是ELISA方法,。目前我國(guó)學(xué)者在這領(lǐng)域仍處于摸索階段,,在分子農(nóng)藥與載體蛋白的聯(lián)結(jié),抗體的制備,ELISA檢測(cè)條件摸索和試劑盒研制等方面與國(guó)外比還有很大差距,。目前國(guó)外已研制出幾十種農(nóng)藥的酶免檢測(cè)試劑盒,,包括有機(jī)磷,、氨基甲酸酯類,、硫化氨基甲酸酯、有機(jī)氯類,、三嗪類,、擬除蟲菊酯類及酰胺類等,。

(2) 酶化學(xué)法

20世紀(jì)90年代,,我國(guó)學(xué)者將醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)血液中膽堿酯酶檢測(cè)原理應(yīng)用于農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)。目前有速測(cè)卡法和酶抑制率法,。酶化學(xué)法優(yōu)點(diǎn)是投資少,,速度快,,操作簡(jiǎn)便,。其缺點(diǎn)是定量不夠準(zhǔn)確,,只能測(cè)出總量,不能檢出具體農(nóng)藥品種,。因此酶化學(xué)法適用于批發(fā)市場(chǎng)篩選抽查,生產(chǎn)基地自查,,也適用于大型儀器檢出前粗選,。我國(guó)蔬菜、水果不得檢出的農(nóng)藥品種,,幾乎都是高毒,、高殘留的有機(jī)磷類、氨基甲酸酯類殺蟲劑,。因此酶化學(xué)法對(duì)快速檢測(cè)蔬菜,、水果中農(nóng)藥殘留,初步判斷其質(zhì)量安全狀況,,防止因食用蔬菜,、水果而發(fā)生農(nóng)藥急性中毒具有一定意義。2001年農(nóng)藥殘留速測(cè)卡法和酶抑制率法被制定為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)推薦方法,。

a,、 速測(cè)卡法

基本原理:膽堿酯酶可催化靛酚乙酸酯水解為乙酸與靛酚(呈藍(lán)色),而有機(jī)磷,、氨基甲酸酯類農(nóng)藥可抑制膽堿酯酶的活性,,使催化水解,變色過程發(fā)生改變,。由此推斷蔬菜中是否含此類農(nóng)藥,。

檢測(cè):選取有代表性樣品,剪切成1cm見方碎片,。取5g放入帶蓋瓶中,,加入10ml緩沖液,振搖50次,,靜置2min,,取速測(cè)卡,白色要片沾取提取液,,放置10min以上,,將卡對(duì)折,用手捏3min,,使紅色藥片與白色藥片疊合發(fā)生反應(yīng),。白色藥片不變色或略有藍(lán)色,均為陽(yáng)性,,變?yōu)樯钏{(lán)或與空白對(duì)照卡相同為陰性。

b,、 酶抑制率法(分光光度法)

基本原理:膽堿酯酶可使乙酰膽堿水解生成膽堿和乙酸,,水解產(chǎn)物與顯色指示劑作用使溶液顯色,。有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥可以抑制膽堿酯酶活性。如果膽堿酯酶活性被*抑制則不能使乙酰膽堿水解,,不能與顯色劑作用,,溶液為無(wú)色;如果活性部分被抑制,,乙酰膽堿部分,,溶液顏色比空白溶液淺。用分光光度計(jì)在一定波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度的變化算出酶抑制率,,從而推算出農(nóng)藥殘留含量,。抑制率用式(1)表示:

I =(A0-At)/A0×100% 1

式中: I —— 抑制率;

A0 —— 正常值(空白值)吸光度,;

At —— 樣品溶液吸光度,。

目前采用的酶有乙酰膽堿酯酶和丁酰膽堿酯酶。底物有乙酰膽堿,、丁酰膽堿,、氯代乙酰膽堿及硫代乙酰膽堿等,顯色劑一般采用5,,5’-二硫代雙(2-硝基苯甲酸),。

2. 氣象色譜法(GC

氣象色譜法具有選擇性高,分離效果好,,高靈敏度等優(yōu)點(diǎn),,是目前采用zui多的方法,約占文獻(xiàn)報(bào)道檢測(cè)方法70%以上,。我國(guó)農(nóng)殘檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)80%以上為氣相法,,氣相色譜用于農(nóng)藥殘留分析的檢測(cè)器主要有ECD,、NPD,、FPD等,,色譜柱大多采用毛細(xì)管柱,檢測(cè)農(nóng)藥類別有有機(jī)氯、有機(jī)磷,、擬除蟲菊酯及氨基甲酸酯等。

3. 液相色譜法(HPLC

主要用于熱穩(wěn)定性差,,氣化困難的農(nóng)藥殘留檢測(cè),,如除蟲脲,、滅幼脲等,。由于紫外檢測(cè)器與氣象色譜檢測(cè)器相比靈敏度低,,主要用于少量氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留檢測(cè),,如西維因等,。熒光檢測(cè)器靈敏度雖有提高,但樣品需采用衍生化技術(shù),,樣品處理繁瑣,,時(shí)間較長(zhǎng),且成本較高,適用農(nóng)藥品種較少,。

4. 食品中農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)

農(nóng)藥多殘留快速檢測(cè)技術(shù)是指一次樣品處理采用一種或多種類型儀器同時(shí)進(jìn)行幾十種,,甚至上百種農(nóng)藥殘留檢測(cè),。我國(guó)20世紀(jì)90年代末由農(nóng)業(yè)部環(huán)保所引進(jìn)美國(guó)農(nóng)藥多殘留快速掃描檢測(cè)技術(shù)(MRSM)并結(jié)合中國(guó)國(guó)情進(jìn)行了改進(jìn),。

該技術(shù)具有操作簡(jiǎn)單,,節(jié)省溶劑,,檢測(cè)速度快,檢測(cè)靈敏度高等優(yōu)點(diǎn),,檢測(cè)農(nóng)藥品種多達(dá)200余種,。使用檢測(cè)設(shè)備為2臺(tái)氣象色譜儀,1臺(tái)液相色譜儀,。其氣相色譜儀采用雙FPD和雙ECD檢測(cè)器及極性不同的雙柱同時(shí)測(cè)定,,定量更準(zhǔn)確,,定性更可靠。

目前,,水果蔬菜中446種農(nóng)藥多殘留測(cè)定方法和動(dòng)物組織中437種農(nóng)藥殘留測(cè)定方法已采用作性方法標(biāo)準(zhǔn)。上述標(biāo)準(zhǔn)方法均采用氣象色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)及液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù),。

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