一,、 流動相溶劑的選擇

1.所選用的流動相溶劑要有一定的化學穩(wěn)定性，不與固定相和樣品組分起反應,，其純度和化學特性必須滿足色譜過程的穩(wěn)定性和重復性的要求,。

2.溶劑應當不干擾檢測器的工作，溶劑應與檢測器匹配,，選擇不影響檢測器正常工作應選擇在測定波長范圍內(nèi)無吸收的流動相,。

3.在制備分離中, 溶劑應當易于除去, 不干擾對分離組分的回收。

4.溶劑的粘度要小,，保證合適的柱壓降,。

5.從實用角度考慮，溶劑應當價格低廉,，容易購得,，使用安全，純度要高,。

二,、流動相溶劑使用的注意事項

1.流動相溶劑應選擇HPLC的溶劑或依此為標準的溶劑。流動相使用前用0.45μm濾膜過濾,、脫氣,，清除微粒和灰塵。 在送液泵內(nèi),，為了防止雜物（固體）進入流路,，裝有吸濾器，但網(wǎng)孔徑為10μm,，比此更小的顆粒仍然可通過,，這會導致流路和柱子堵塞和污染。為此,，建議常用0.45μm濾膜過濾,。流動相溶劑須經(jīng)脫氣，如不脫氣，在溶劑混合時,，或壓力溫度變化時容易產(chǎn)生大量氣泡,，會導致泵誤動作和輸液不暢，檢測器產(chǎn)生噪聲信號等,。

2.流動相恢復到室溫后使用,。流動相溫度與室溫相差時，流動相在恢復到室溫前,，基線水平很難穩(wěn)定,，特別是發(fā)生漂移，也容易產(chǎn)生氣泡等現(xiàn)象,。水與有機溶劑混合時,，混合液變化大，往往會與室溫相差很大,，務必注意,。

3.做HPLC流動相的試劑應用HPLC級的、水應用二次蒸餾水,，水相流動相需經(jīng)常更換,，防止長菌變質。使用去離子水,、針劑水,、純凈水（炊用）并不合適、尤其是做梯度洗脫時,，水中的不純物會成為鬼峰,，從而干擾分析結果。

4.流動相的pH值過高或過低,，流動相使用純水,，使用高濃度磷酸鹽緩沖溶液，使用離子對試劑等,，均可能造成色譜柱填料被化學破壞,，這種對色譜柱固定相及鍵合相的破壞通常是不可修復的

5.用緩沖鹽做流動相時，在使用前和使用后都要用水清洗流路,，禁止將緩沖溶液留在流路中靜置或更長時間,。

6.若需要使用含鹽的流動相，使用前請過濾,。并且使用該含鹽流動相前,，色譜柱需先用低比例有機相（有機相含量應不低于10%）的溶液沖洗，以免緩沖鹽析出,。流動相若為蒸餾水或含鹽的緩沖液,，建議現(xiàn)用現(xiàn)配,，以免流動相因滋生微生物而造成柱填料的污染。

7.進行梯度實驗時要注意梯度變化過程中流動相的互溶性,，避免因流動相不互溶而導致的緩沖鹽析出問題,。反相系統(tǒng)更換正相系統(tǒng)或正相系統(tǒng)更換反相系統(tǒng)時，用異丙醇置換系統(tǒng)內(nèi)的儲存流動相后在接柱子,。

8.在更換兩種互不相溶的流動相時,，中間要用異丙醇溶液清洗過渡。例如：先用甲醇水做流動相,，然后在用正己烷做流動相時，一定要先用異丙醇溶液沖洗甲醇水,，然后用正己烷沖洗異丙醇,，反之也是一樣。在更換流動相時還要考慮色譜柱是否更換,。

9.儀器在短期（兩三天）不用時,，流路中可以是甲醇或水。儀器在長期不用時,，流路中應用甲醇,。

10.對于UV等檢測器用于高靈敏度檢測時，要使用UV吸收性小的HPLC的溶劑作為流動相溶劑,，如甲醇,、乙腈等。

11.當流動相溶劑為乙腈時,，流速為1ml/min泵的正常壓力5～7Mpa之間,，如果壓力逐漸降低，基線也出現(xiàn)異常,。這是由于乙氰的粘性大,，導致泵的流速降低?？蛇m當提高流速使泵的壓力恢復正常即可,。

12.流動相含有濃硫酸、濃硝酸,、二氯乙酸,、二氯甲烷、丙酮,、四氯呋南,、二甲化砜等溶劑，會對流路中的PEEK樹脂管路強度變成差,、PEEK樹脂管容易破裂使溶劑外濺,。流動相含有鹵素離子的溶劑,，如KCI、NaCI,、NH4CI等,。對流路中的不銹鋼材料有腐蝕作用，以上的溶劑須盡量避免使用,。非用不可時,，分析完了后，應立刻用蒸餾水把全流路清洗干凈,。

13.用于檢定梯度等性能時,，短時間使用在0.5%以下的低濃度丙酮水溶液是沒有問題的。

14.注意：稀硝酸與甲醇不能混合,，否則有可能會引起爆炸,。

三、液相色譜流動相的貯存

流動相一般貯存于玻璃,、聚四氟乙烯或不銹鋼容器內(nèi),，不能貯存在塑料容器中。因許多有機溶劑如甲醇,、乙酸等可浸出塑料表面的增塑劑,，導致溶劑受污染。這種被污染的溶劑如用于HPLC系統(tǒng),，可能造成柱效降低,。貯存容器一定要蓋嚴，防止溶劑揮發(fā)引起組成變化,，也防止氧和二氧化碳溶入流動相,。

磷酸鹽、乙酸鹽緩沖液很易長霉,，應盡量新鮮配制使用,，不要貯存。如確需貯存,，可在冰箱內(nèi)冷藏,，并在3天內(nèi)使用，用前應重新濾過,。容器應定期清洗,，特別是盛水、緩沖液和混合溶液的瓶子,，以除去底部的雜質沉淀和可能生長的微生物,。因甲醇有防腐作用，所以盛甲醇的瓶子無此現(xiàn)象,。