概述

校準曲線包括標準曲線和工作曲線，前者用標準溶液系列直接測量,，沒有經(jīng)過預(yù)處理過程，這對于樣品往往造成較大誤差,；而后者所使用的標準溶液經(jīng)過了與樣品相同的消解,、凈化,、測量等全過程。

凡應(yīng)用校準曲線的分析方法,，都是在樣品測得信號值后,，從校準曲線上查得其含量（或濃度）。因此,，繪制準確的校準曲線,，直接影響到樣品分析結(jié)果的準確與否。此外,，校準曲線也確定了方法的測定范圍,。

一、如何正確繪制校準曲線

用一系列被測物標準溶液,，按照標準方法規(guī)定的步驟,，將被測物轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩芤海苽浜玫臉藴氏盗泻涂瞻?，在方法選定的波長下,，測定吸光度。已被測物濃度為橫坐標,，吸光度為縱坐標,，繪制校準曲線。

步驟：

1）對標準系列,，溶液以純?nèi)軇閰⒈冗M行測量后,，應(yīng)先作空白校正，然后繪制標準曲線,；

2）標準溶液一般可直接測定,，但如試樣的預(yù)處理較復(fù)雜致使污染或損失不可忽略時，應(yīng)和試樣同樣處理后再測定,；

3）校準曲線的斜率常隨環(huán)境溫度,、試劑批號和貯存時間等實驗條件的改變而變動。因此,，在測定試樣的同時,，繪制校準曲線zui為理想。否則,，應(yīng)在測定試樣的同時,，平行測定零濃度和中等濃度標準溶液各兩份，取均值相減后與原校準曲線上的相應(yīng)點核對,。其相對差值根據(jù)方法精密度不得大于5%～10%,，否則，應(yīng)重新繪制校準曲線；

二,、如何檢驗校準曲線

1）線性檢驗

即檢驗校準曲線的精密度,，對于以4～6個濃度單位所獲得的測量信號值繪制的校準曲線，分光光度法一般要求其相關(guān)系數(shù)|r|≥0.9990,，否則應(yīng)找出原因并加以糾正,，重新繪制合格的校準曲線。

2）截距檢驗

即檢驗校準曲線的準確度,，在線性檢驗合格的基礎(chǔ)上,，對其進行線性回歸，得出回歸方程y=a+bx,，然后,，將所得截距a與0作t檢驗，當(dāng)取95%置信水平,，經(jīng)檢驗無顯著性差異時,，a可做0處理，方程簡化為y=bx,，移項得x=y/b,。在線性范圍內(nèi)，可代替查閱校準曲線,，直接將樣品測量信號值經(jīng)空白校正后,，計算出試樣濃度。

當(dāng)a與0有顯著性差異時,，表示校準曲線的回歸方程計算結(jié)果準確度不高,，應(yīng)找出原因予以校正后，重新繪制校準曲線并經(jīng)線性檢驗合格,。在計算回歸方程,，經(jīng)截距檢驗合格后投入使用?；貧w方程如不經(jīng)上述檢驗和處理,，就直接投入使用，必將給測定結(jié)果引入差值相當(dāng)于解決a的系統(tǒng)誤差,。

3）斜率檢驗

即檢驗分析方法的靈敏度,，方法靈敏度是隨實驗條件的變化而改變的，在*相同的分析條件下,，僅由于操作中的隨機誤差導(dǎo)致的斜率變化不應(yīng)超出一定的允許范圍,，此范圍因分析方法的精度不同而異，例如,，一般而言,，分子吸收分光光度法要求其相對差值小于5%，而原子吸收分光光度法則要求其相對差值小于10%等。

三,、如何正確的控制校準曲線

被測物轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩芤旱姆磻?yīng)稱為顯色反應(yīng)或發(fā)色反應(yīng),，顯色反應(yīng)介質(zhì)的pH條件,、顯色劑用量,、顯色反應(yīng)的時間和溫度、為消除共存物干擾而加入的掩蔽劑,、甚至加試劑的順序,，都要按照方法步驟的要求執(zhí)行。有時,，標準系列雖然不像實際試樣那樣組成復(fù)雜,，但仍要求與試樣進行同樣的處理步驟，以便控制校準曲線上的數(shù)據(jù)點的空白,、回收率等因素,。

建立校準曲線時，測量吸光度的參比有兩種選擇：

*種方法用純?nèi)軇┳鲄⒈?，兩個比色皿都放溶劑時,，“樣品比色皿”的吸光度測定值為比色皿成對性校正值。此后,，所有樣品吸光度測定值都須扣除此值,，進行校正，然后,，以純?nèi)軇閰⒈?，測定空白及標準系列的吸光度，繪制校準曲線,。

第二種方法直接用空白為參比,，當(dāng)兩個比色皿都放空白時，測定比色皿成對性校正值,，然后,，測定標準系列的吸光度，繪制校準曲線,。兩種方法得到的兩條校準曲線互相平行,，但*種方法可測定空白的水平，后一種方法不能測定空白,，理論上校準曲線通過原點,。若空白為零，兩條校準曲線重合,。無論用什么作參比,，實樣測定時應(yīng)該使用與建立校準曲線相同的比色皿和同樣的參比。比色皿的成對性校正對于使用已久的比色皿有必要，尤其是測量吸光度很小的樣品時,，校正可保證測量值的可靠性和重復(fù)性,。

小結(jié)

    使用校準曲線時應(yīng)注意：校準曲線包括“標準曲線”和“工作曲線”。應(yīng)用標準溶液制作校準曲線時,，如果分析步驟與樣品的分析步驟相比有某些省略時,，則制作的校準曲線稱為標準曲線。如果模擬被分析物質(zhì)的成分,，并與樣品*相同的分析處理,，然后，繪制的校準曲線稱為工作曲線,。因此,，如果基體效應(yīng)對分析方法至關(guān)重要時，應(yīng)使用含有與實際樣品類似基體的標準溶液系列進行校準曲線繪制,。

（內(nèi)容來源衡天力儀器網(wǎng)）