本試劑盒只能用于科學研究,，不得用于醫(yī)學診斷,。

兔Bcl2拮抗/殺傷因子1（BAK1）ELISA檢測試劑盒使用說明書

【兔Bcl2拮抗/殺傷因子1（BAK1）ELISA檢測試劑盒 試劑盒名稱】

兔Bcl2拮抗/殺傷因子1（BAK1）ELISA檢測試劑盒

【 試劑盒用途】

定量兔血清、血漿及相關液體樣本中Bcl2拮抗/殺傷因子1（BAK1）的含量

【檢測原理】

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）,。將標準品,、待測樣本加入到預先包被Bcl2拮抗/殺傷因子1（BAK1）透明酶標包被板中，溫育足夠時間后,，洗滌除去未結合的成分,，再加入酶標工作液，溫育足夠時間后,，洗滌除去未結合的成分,。依次加入底物A、B,，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉化為藍色產物,，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中Bcl2拮抗/殺傷因子1（BAK1）濃度呈正相關,，450nm波長下測定OD值,，根據(jù)標準品和樣品的OD值，計算樣本中Bcl2拮抗/殺傷因子1（BAK1）含量,。

【 試劑盒組成】

備注：標準品用標準品稀釋液依次稀釋為：200,、100、50,、25,、12.5、6.25ng/ml

【需要而未提供的試劑和器材】

1,、37℃恒溫箱

• 標準規(guī)格酶標儀
• 精密移液器及一次性吸頭
• 蒸餾水
• 一次性試管
• 吸水紙

【操作步驟】

1,、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復溫平衡30分鐘,。

2,、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

3,、加標準品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標包被板,，固定于框架上，分別設置標準品孔,、待測樣本孔和空白對照孔,，記錄各孔位置,，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）,；空白對照孔不加。

4,、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。

5、洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）,。

6,、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL，空白對照孔不加,。

7,、溫育：重復4的操作。

8,、洗板：重復5的操作,。

9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL,，再加入顯色劑B液 50μL,，37℃避光顯色15min。

10,、終止：取出酶標板,，每孔加終止液50μL，終止反應（顏色由藍色立轉黃色）,。

11,、測定：以空白孔調零，在終止后15分鐘內,，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）,。

12、計算：根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值,，計算出標準曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,，也可以使用各種應用軟件來計算,。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。

【 樣本要求】

1,、樣本不能含疊氮鈉（NaN₃）,，因為疊氮鈉（NaN₃）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。

2,、標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能立即試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融,。

3,、樣本應充分離心，不得有溶血及顆粒,。

【注意事項】

1,、實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,。

2,、酶標包被板開封后如未用完，應立即裝入密封袋中加干燥劑保存,。

3,、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,，取平均值,，以減小實驗誤差。

4,、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,，計算結果乘以5才是樣本實際濃度。

5,、本試劑盒定量范圍為0.1-200ng/ml,，超過此范圍，為標準曲線延伸計算所得,，不做為準確定量結果,，請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果（0.1-200ng/ml范圍內），乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度,。

6,、若顯色過淺，可適當延長底物溫育時間,。

7,、為避免交叉污染,，標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭,；酶標工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣,，不得碰到微孔,；不得重復使用封板膜。

8,、試劑盒保質期內使用,，不同批號的試劑不得混用。

9,、底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下。

【操作程序總結】

準備試劑,，樣品和標準品 

加入準備好的樣品和標準品,，37℃反應30分鐘

洗板4次，加入酶標試劑,，37℃反應30分鐘

洗板4次,，加入顯色液A、B,，37℃顯色15分鐘

加入終止液

15分鐘之內讀OD值

計算

【檢測范圍】

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【規(guī)格】

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【貯藏】

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【有效期】

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