血清對于在傳統(tǒng)培養(yǎng)基配方中生長和增殖的大多數(shù)細(xì)胞系來說是需要的,,因為大多數(shù)單獨(dú)的培養(yǎng)基并不能提供細(xì)胞生長所需要的全部營養(yǎng),如MEM培養(yǎng)基,,較為常用的量為8%~10%的比例,原代培養(yǎng)使用量為15%~20%,,而特殊的低血清培養(yǎng)基血清量可降至3%左右,,細(xì)胞的形態(tài)和功能不受影響。
血清是非常復(fù)雜的混合物,,成分多樣,對細(xì)胞生長具有促進(jìn)作用:
1)提供基本營養(yǎng)物質(zhì),,如氨基酸,、維生素、無機(jī)物,、脂類物質(zhì),、核酸衍生物等,是細(xì)胞生長必須的物質(zhì),;
2)提供激素和各種生長因子,如胰島素,、腎上腺皮質(zhì)激素(、地塞米松),、類固醇激素(雌二醇,、睪酮、孕酮),、成纖維細(xì)胞生長因子、表皮生長因子,、血小板生長因子等,;
3)提供結(jié)合蛋白,可攜帶重要的低分子量物質(zhì),,如白蛋白攜帶維生素,、脂肪、以及激素等,,轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵,在細(xì)胞代謝過程中起重要作用,;有些情況下結(jié)合蛋白能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,,起到解毒作用;
4)血清能提供促接觸和伸展因子,,使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷,,對培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用,;
5)能夠維持培養(yǎng)基的pH 值,起酸堿緩沖液作用,;
6)有一些細(xì)胞,,如內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋白酶,,血清中含有抗蛋白酶成分,,起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的,,現(xiàn)在則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因為胰蛋白酶已經(jīng)被廣泛用于貼壁細(xì)胞的消化傳代,;
7)血清蛋白形成了血清的粘度,,可以保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷,特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時,,粘度起到重要作用,;
8)血清還含有一些微量元素和離子,,它們在代謝穩(wěn)定和解毒中起重要作用。
但是血清的加入也帶來了很多問題:
1)血清的成分可能有幾百種之多,,目前對其準(zhǔn)確的成分,、含量及其作用機(jī)制仍不清楚,尤其是對其中一些多肽類生長因子,、激素和脂類等尚未充分認(rèn)識,,這給研究工作帶來許多困難;
2)血清都是批量生物試劑,,各批量之間差異很大,,這種差異來源于不同的制備方法和除菌方法、動物的年齡差別及血清的儲存條件等,,而且與取血動物的來源關(guān)系密切,。不同的牧場、不同的氣候天氣及其他環(huán)境因素都可能影響血清的質(zhì)量,。要保證每批血清的相似性極為困難,從而使實驗的標(biāo)準(zhǔn)化和連續(xù)性受到限制,。因此選好了一種血清就要盡可能使用它,。在需要更換時,也要盡量保持與原有的一批血清相似?,F(xiàn)在很多公司都提供血清預(yù)留,,你一旦選定了某個批次的血清,備足一年的量,,這樣可以避免很多麻煩;
3)對大多數(shù)細(xì)胞,,在體內(nèi)狀態(tài),,只是在損傷愈合以及血液凝固過程中才接觸血清,因此使用血清有可能改變某種細(xì)胞在體內(nèi)的正常狀態(tài),,血清可能促進(jìn)某些細(xì)胞的生長(成纖維細(xì)胞)同時抑制另一類細(xì)胞生長(表皮細(xì)胞),;
4)血清含一些對細(xì)胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì),如多胺氧化酶,,能與來自高度繁殖細(xì)胞的多胺反應(yīng)(如精胺、亞精胺)形成有細(xì)胞毒性作用的聚精胺,,補(bǔ)體,、抗體、細(xì)菌毒素等都會影響細(xì)胞生長,,甚至造成細(xì)胞死亡,;
5)血清取材中可能帶入支原體、病毒,,如具有爭議的黑膠蟲,,對細(xì)胞產(chǎn)生潛在影響,;
6)大規(guī)模生物試劑中,血清來源越來越困難,,價格昂貴,,是構(gòu)成生物試劑成本的主要部分之一。
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