鴨瘟酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒定性使用說(shuō)明書(shū)

本試劑僅供研究使用  

 目的：本試劑盒用于檢測(cè)鴨血清,，血漿及相關(guān)液體樣本中鴨瘟水平,。

操作步驟：

• 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔,、陽(yáng)性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）
• 加樣：分別在陰,、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50μl,。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻，
• 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。   
• 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用
• 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次,，拍干,。
• 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外,。
• 溫育：操作同3,。
• 洗滌：操作同5。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl,，再加入顯色劑B 50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘
• 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
• 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）,。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

結(jié)果判定：

  試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10

  臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

  陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為鴨瘟陰性

  陽(yáng)性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為鴨瘟陽(yáng)性

注意事項(xiàng)

1．操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,，本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。

• 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。

5．底物請(qǐng)避光保存,。

6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，參考波長(zhǎng)為630nm

7．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。終止液為2M的硫酸，使用時(shí)必須注意安全,。