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如何用牛津杯做微生物抑菌試驗藥敏實驗

來源:北京吉泰遠成科技有限公司   2016年12月07日 23:46  

      抑菌試驗/藥敏實驗方法主要有兩種,即擴散法和稀釋法,。其中擴散法屬手工測試方法,通過測試藥物紙片或者牛津杯在固體培養(yǎng)基上的抑菌圈的大小,,判斷細菌對該種藥物是否敏感。
稀釋法包括試管稀釋法和微量稀釋法,,通過測試細菌在含不同濃度藥物培養(yǎng)基內(nèi)的生長情況,,判斷其zui低抑菌濃度(MIC)。 
      由于擴散法操作簡單,,成本低,,已經(jīng)被大多數(shù)實驗室和基層單位所采用。擴散法又包括紙片法,、牛津杯法和打孔法,。 
一、實驗原理
1,、將培養(yǎng)基平板置培養(yǎng)箱中培養(yǎng),,一方面試驗菌(指示菌)開始生長繁殖;另一方面抗生素呈球面擴散,,形成遞減的梯度濃度,,離杯越近,抗生素濃度越大,,離杯越遠抗生素濃度越小,。
2、在牛津杯周圍抑菌濃度范圍內(nèi)的細菌的生長被抑制,,形成透明的抑菌圈,。
3,、抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度(藥敏實驗)或藥物對指示細菌的抑菌程度(抑菌試驗),。
4、抗生素濃度越高,,抑菌圈越大,。
5、在抑菌圈的邊緣處,,瓊脂培養(yǎng)基中所含抑菌物質(zhì)的濃度即為該菌懸液中對該種指示菌的zui低抑菌濃度(MIC) ,。
6,、抑菌圈直徑與藥物對測試菌的zui低抑菌濃度 呈負相關(guān),即抑菌圈愈大,,MIC愈小,。
二、實驗材料
培養(yǎng)基:牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基
菌種:大腸桿菌(E.coli),、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus),、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)
藥品:阿莫西林、黃芪多糖,、
其他:牛津杯,、培養(yǎng)皿、酒精棉,、酒精燈,、涂布器、移液槍,、1mL,、200uL槍頭、恒溫培養(yǎng)箱,、超凈工作臺,、接種環(huán)
牛津杯”可從北京吉泰遠成科技有限公司采購,牛津杯是內(nèi)徑為6mm,,外徑為7.8mm,,高10mm的圓筒形管子,管子的重量盡可能相等,。 
三,、實驗操作
1. 倒平板:將已滅菌的瓊脂培養(yǎng)基加熱到*融化,倒在培養(yǎng)皿內(nèi),,每皿約20ml,,凝固。
2. 標記:菌種,、牛津杯擺放位置,、藥物及其 濃度
3. 制備菌懸液:用生理鹽水洗下試管內(nèi)的菌苔并稀釋。
4. 菌液涂布:吸取1mL 菌液入平板表面,,用涂布器涂布將菌液涂布均勻
5. 擺放牛津杯:在培養(yǎng)基表面垂直擺放牛津杯,,輕輕加壓,使其與培養(yǎng)基接觸無空隙,。

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