液相色譜儀HPLC分析中，在色譜柱正常,，樣品靈敏度足夠，分析方法合適,，色譜峰在出峰時間較短的條件下（不包括梯度）,，峰型應對稱而尖銳。但是,，在對樣品了解程度不夠,，方法不妥，樣品處理方法及進樣方式不合理下,，會出現(xiàn)各種意想不到的問題,，本文主要說明色譜雙峰可能的原因及處理方法。 

        色譜雙峰可能的原因有三種,。

1,、色譜柱

        如果你分析樣品時發(fā)現(xiàn)每個色譜峰都雙峰出現(xiàn)（出峰越快，雙峰的可能性會減少）,，尤其采用單一純物質時,，可以肯定色譜柱出問題，柱頭受損或柱頭固定相變臟或流失,。

        如果進樣量少,，原來色譜柱正常，色譜峰的形狀多為一大峰帶一小峰,，不一定拖尾,，這一般應是柱頭受堵，將色譜柱反過來接,，用流動相沖洗或酸洗或其它溶劑,，將堵在柱頭的殘留物沖掉，再反過來,，一般情況下就行了,。

        當然不反沖，正沖有時也會正常的,。如果峰拖尾,，雙峰強弱相差不大，柱頭固定相變臟或流失可能性更大,，這是可以將進樣那頭擰開,，將微孔濾片超聲,，柱頭刮去一部分填料，重新填上新填料擰緊,，不過這種活,，需要一定技術，同時不能老干那種事,，否則用不了幾次,，色譜柱就會應柱效很低而報廢。

2,、溶劑極性及進樣量

        許多HPLC分析者對此可能不以為然,，一般的HPLC的書籍和文獻都不會提到這方面的內(nèi)容，而這確是雙峰產(chǎn)生的一個很重要的原因,。目前HPLC分析多為反相色譜,，流動相多為甲醇、乙腈,、水,，加各種添加劑以改善分離性能。

        樣品一般用與流動相相溶的溶劑溶解,。*的溶解方法是用流動相溶解,，但是很多情況是不一致的。

        當用溶劑極性強度大的試劑,，如純甲醇,、純乙腈，純乙醇,，而分析體系中以水為主,，樣品進樣量大，如定量管為20ul,，此條件下*可以肯定,，單一的純物質出雙峰，第二峰比*峰?。看味疾惶粯樱?，且拖尾，保留時間會提前（相對進樣量少而言）,，將進樣量減少一半以上,，峰型將變?yōu)檎！＿@是樣品的溶劑與流動相極性相差太大,，而流動相來不及將其稀釋達到平衡造成的,。

        上面提到進樣量造成雙峰的一個原因，另一個原因是,，進樣量不一定大,，但量很大,，色譜圖上的雙峰緊靠在一起，基本上齊高,，不拖尾（如果出峰很快,，也可能是色譜柱問題）。將樣品稀釋再進樣就可以了,，這是由于進樣量過大,，色譜柱過載造成的。

3,、樣品的特性

        有些樣品由于其化學結構的特點,，存在互變異構現(xiàn)象，而這種互變異構體無法分開,，而是以一個動態(tài)平衡存在。在色譜分析時,，在一個特定的條件下,，一種物質將出現(xiàn)雙峰，雙峰靠的很近,，基本齊高,，不拖尾，條件稍一變化,，尤其pH,，雙峰現(xiàn)象將消失，如紅霉素等,。

        有的樣品紫外的色譜圖上看不到雙峰,，但在LC－MS下，用質譜檢測器,，其質譜的總離子流圖上較明顯,，例如農(nóng)藥啶蟲瞇（吡蟲清）。

（內(nèi)容來源衡天力儀器網(wǎng)）