一,、實驗儀器及試劑

1.器具電子天平,、70℃恒溫箱、玻璃制刀機,、半/超薄切片機,、顯微鏡、包埋模、制刀用的玻璃條,、鑷子,、刀片。

2.試劑

 (1)固定劑：FAA

 (2)脫水劑：20%,、40%、60%,、80%,、90%、95%,、100%的乙醇,；丙酮

(3)樹脂：Spurr樹脂

(4)染色劑：1%堿性品紅

二、實驗步驟

1.取材和固定：取樣時所用的器具必須干凈,，刀,、剪等必須鋒利，在操作時盡量避免拉,、鋸,、壓等動作對組織細胞造成的機械損傷。一般樣品塊的大約為1立方毫米,，取材完成后立即放入固定液中,，真空泵抽氣兩到三次，每次1-2min（注意不要讓固定液沸出,，如抽完后液體較少,，可再補加固定液）。

2.脫水：用50%,、60%,、70%、85%,、95%,、100%的乙醇分別浸漬固定的材料，每種濃度處理10～15min

3.置換

(1)在管瓶中加入2ml無水乙醇和1ml丙酮,，處理材料10min

(2)向管瓶中追加1ml丙酮,，處理材料10min

(3)向管瓶中再追加2ml丙酮，處理材料10min

(4)傾倒出管瓶中的無水乙醇和丙酮混合液,，加入純丙酮3次,，每次10min。

4.浸透

(1)在管瓶中加入1ml丙酮,，向內滴入1滴Spurr樹脂,，1～2h

(2)向管瓶中追加1至數滴Spurr樹脂，使Spurr樹脂的濃度逐漸提高,，每滴加一次Spurr樹脂,，放置1～2h,，共滴加0.3ml左右的樹脂，使樹脂濃度達到25%左右,。

(3)用吸管吸去管瓶中0.5～0.8ml的丙酮和Spurr樹脂的混合液,，然后加入純Spurr樹脂0.5ml，使樹脂濃度達到50%～60%左右,，2～3h

(4)用吸管吸去管瓶中的丙酮和Spurr樹脂的混合液,，加入0.5～0.8ml的Spurr樹脂，2～3h

(5)更換新配制的Spurr樹脂1ml,，過

(6)重復換樹脂3次,，每次12h

5.包埋與聚合

(1)先將恒溫箱調至溫度至70℃，包埋模事前烘干置干燥器中存放,。

(2)在濕度小的房間里進行包埋操作,。在包埋模的中放上已浸透的材料(用牙簽不損傷樣品地桃)，用滴管吸取新配制的Spurr樹脂,，并注滿每個穴孔,，用牙簽撥樣品，使樣品按一定方位(有利修塊,、切片和觀察)排列,。做好記載(各穴孔中放的是什么樣品

(3) 聚合：將包埋樣品的包埋模放入70℃恒溫箱中聚合，8h后取出置干燥器中存放,。多余的樹脂可放在膠囊中或放在包埋模的穴孔中同樣品一同聚合,。

6.修塊

用銼刀或鐵砂皮磨樣品塊，使樣品稍稍暴露,，使待切部位呈方形或長方形,，zui后用刀片將樣品塊的磨面切平

7.玻璃刀的制作

用玻璃制刀機先將玻璃條制成邊長為25mm的正方塊，然后再將每正方塊制作成2把璃制刀,。

8.切片,、貼片

(1)固定樣品塊和玻璃刀

將樣品塊和玻璃刀固定在半薄切片機上，玻璃刀的避樣品角約為5度,，切片機裝樣品部位平放時,，玻璃刀刀口與樣品塊處于同一高度。調節(jié)玻璃刀前后位置,，使刀口接近樣品塊,。

 (2)荒切

開動切片機，調節(jié)進刀距離和速度,，讓玻璃刀荒切樣品塊,，使樣品塊的切面逐漸平整光滑起來。

(3)切片

當樣品塊的切面平整光滑后便可正式切片。作為光鏡觀察用的半薄切片厚度一般控制在1-2μm左右,。

(4)貼片

當切到理想切片時,，用尖頭鑷子夾住切片，并把切片釋放到滴有水滴的載玻片的水滴上,，然后將載玻片放到烤片機上45℃烤片,，當載玻片上的水滴被烤干時切片就被貼在載玻片上。

(5) 染將堿性品紅染液均勻覆蓋在載玻片上,，45℃烤干,，隨后用50%乙醇沖洗，并再次把切片烘干,。

(6)封片,，觀察

注意：透射電鏡樣品固定液為2.5%戊二醛溶液