制備型高速離心機的幾種分離方法:
A.差速離心:逐次增加離心力,,每次可沉降樣品溶液中的一些組份。
差速離心是一種zui常用的方法,。在這種方法中,,離心管在開始時裝滿了均一的樣品溶液,。通過在一定速度下一定時間的離心后,就可得到兩個部份:沉淀和上清液,。
通常在*次離心時把大部分不需要的大粒子沉降去掉,。這時所需的組份大部分仍留在上清液中。然后將收集到的上清液以更高速度離心,,把所需的粒子沉積下來,。離心的時間要選擇得當(dāng),使大部份不需要的更小的粒子仍留在上清液中,。對于得到的沉淀和上清液可以進行進一步的離心,,直到達到所需要的分離純度為止。
差速離心的特點是操作簡單,,但分離純度不高,。
B.密度梯度離心法:可以同時使樣品中幾個或全部組份分離,具有很好的分辨率,。
(1)速率區(qū)帶法:
根據(jù)樣品中不同粒子所具有的不同的尺寸大小及沉降速度(S),。大致步驟如下:
在離心管中裝入密度梯度溶液,溶液的密度從離心管頂部至底部逐漸增加(正梯度),。
將所需分離的樣品小心地加至密度梯度溶液的頂部,。樣品在梯度溶液表面形成一負梯度。
由于不同大小的粒子在離心力作用下,,在梯度中移動的速度不一樣,,所以經(jīng)過離心后會形成幾條分開的樣品區(qū)帶。
注意:樣品粒子的密度必須大于梯度液注中任一點的密度,。離心過程必須在區(qū)帶到達管子底部前停止,。
(2)等密度離心法:
根據(jù)粒子的不同密度來分離。離心過程中,,粒子會移至與它本身密度相同的地方形成區(qū)帶,。
密度樣度的選擇要使梯度的范圍包括所有待分離粒子的密度。樣品可以在密度梯度液粒上面或均勻分布在密度梯度中,。經(jīng)離心后,,樣品粒子達到它們的平衡點。
注意:平衡后粒子的分離*由其密度決定,,與時間無關(guān),,此時再改變離心轉(zhuǎn)速,,只能改變區(qū)帶的相對位置。
密度梯度分析法
(1)梯度介質(zhì)性質(zhì)與選擇:
A,、應(yīng)具備的性質(zhì):
梯度物質(zhì)的選擇原則是滿足分離方法的基本要求,,一個理想的密度材料標準它應(yīng)是:
所形成的溶液密度應(yīng)包括所需要的密度范圍。
具有某些性質(zhì),,如折射率,,據(jù)此可測定它的濃度。
所形成的溶液粘度低,。
不損傷所分離的樣品,。
離心分離后容易除去。
不妨礙分離積分的分析,。
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