應(yīng)用濾袋技術(shù)測定中性洗滌纖維（NDF）的方法

Ringbio纖維分析儀

A. 試劑

(a)稱取30.0g十二烷基硫酸鈉（USP）,；18.61g 乙二胺四乙酸二鈉（Na₂EDTA）；6.81g四硼酸鈉（Na₂B₄O₇）十水,；4.56g磷酸氫二鈉（Na₂HPO₄）-無水,；10.0 ml三甘醇C₆H₁₄O₄,；全部溶解在1L水中,，適當(dāng)?shù)臄嚢韬图訜嵊兄谌芙狻z查適當(dāng)?shù)?/span>pH在6.9—7.1,。

(b) α-淀粉酶(Alpha-amylase) –熱穩(wěn)定細(xì)菌α-淀粉酶：活性為17,400 單位/ mL,。1個活性單位表示能將1 mg可溶性淀粉用30 min水解,。

(c) 無水亞硫酸鈉（Na₂SO₃）,。

(d) 丙酮：無色，并且蒸發(fā)后無殘渣,。

B. 安全注意

(a) 丙酮易燃,，操作時應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，避免吸入或與皮膚接觸,。將濾袋放入烘箱之前,，要確保濾袋*干燥，丙酮*揮發(fā),。

(b) 十二烷基硫酸鈉對黏膜有刺激,，因此操作時要帶防塵口罩和手套。

C.設(shè)備

(a) 消化裝置- Ringbio纖維分析儀

(b) 濾袋- Ringbio濾袋

(c) 封口機

(d) 干燥器

(e) 分析天平-至0.1mg

(f) 電熱干燥箱

(g) 耐溶劑記號筆

D. 步驟

(a) 濾袋和樣品的準(zhǔn)備

1) 用耐溶劑的記號筆給濾袋編號,，稱重(m ₁),。

2) 直接準(zhǔn)確稱取0.5g (± 0.05 g )制備好的樣品 (m) 于濾袋中。樣品需要粉碎過1mm篩,。

3) 在距離濾袋上邊緣大約4 mm用封口機封口,。然后將樣品在濾袋中展平，均勻分布,。

4) 至少取一個空白濾袋(C₁),，同時做空白測定。

5) 一次 多可以在濾袋架上放24個濾袋。無論放置濾袋數(shù)量多少,，8層濾袋架上托盤要全部使用,，每層放三個濾袋。層與層之間錯開120度,。然后將裝有濾袋的支架放入纖維分析儀消煮器中,，然后將金屬壓錘放在支架頂部，以確保消煮過程中不浮起,。

6) 樣品含有大豆產(chǎn)品或脂肪超過5% ,，將裝有樣品的濾袋放入帶蓋玻璃容器中，加丙酮使濾袋*浸沒,，蓋好蓋子,。搖動容器10次，浸泡10 分鐘,。然后更換新的丙酮,，重復(fù)上述操作一次。 后將濾袋取出,，放在網(wǎng)篩上涼干,。

例外：烘烤大豆，由于烘烤大豆的特殊性,，需要采用改進(jìn)后的下面脫脂方法,。將裝有樣品的濾袋放入帶蓋玻璃容器中，加丙酮使濾袋*浸沒,，蓋好蓋子,。搖動容器10次，然后更換新的丙酮,，浸泡12小時,。取出濾袋，放在網(wǎng)篩上涼干,。

(b) 當(dāng)處理24個濾袋時,，向2000 mL中性洗滌劑溶液中加無水亞硫酸鈉20 g (0.5 g/50 mL ND 溶液) 和 4.0 g 熱穩(wěn)定α-淀粉酶。讓無水亞硫酸鈉在溶液中充分溶解,。向容器中加入該溶液,。如果處理樣品少于20 個濾袋，按照每個濾袋加100 mL酸溶液,，但不能少于1500 mL,，確保濾袋托盤*浸沒。

(c)  打開HEAT+AGITATE開關(guān),，確保濾袋支架攪拌正常,。蓋上蓋子并*密封好,。 儀器將加熱并維持溶液溫度100°C。 設(shè)置處理時間75分鐘,，包括加熱升溫時間,。

(d) 時間到后加熱攪拌自動關(guān)停，消煮結(jié)束,，按下EXHAUST按鍵,，排出廢液，在打開蓋子之前一定將熱的溶液排完,。

*警示：消煮器中的溶液是有壓力的。 在打開蓋子之前一定將廢液閥打開以釋放壓力,。

(e) 溶液排完后,，打開蓋子，關(guān)閉排液閥,，加2L (70°C~90°C) 蒸餾水,，并且第1和第2次淋洗時同時加α-淀粉酶，放下蓋子,，但不旋緊,。按下FLUSH按鍵，攪拌3~5 分鐘,。按下EXHAUST按鍵,，排掉廢液，重復(fù)2次,，共淋洗3次,。

(f) 后一次淋洗后，加冷的自來水以操作和使冷卻容器,，為下輪測定做好準(zhǔn)備,。排干水，從容器中取出帶濾袋的支架,。將濾袋從濾袋支架上取下來,，輕輕擠壓去掉多余的水。然后將濾袋放入250 mL 燒杯中,，加丙酮至浸沒濾袋,，浸泡3~5 分鐘 ，然后取出并輕輕擠壓去掉多余的丙酮,。

(g) 在通風(fēng)櫥中展開濾袋,，讓其自然干燥。*干燥后放入102°C±2°C 烘箱烘干4小時,。

*警告：在丙酮*揮發(fā)掉之前不能把濾袋放入烘箱中,。

(q) 從烘箱中取出濾袋，直接放入干燥器中冷卻至室溫，然后稱重（m₂）,。

E. 計算

試樣中中性洗滌纖維質(zhì)量分?jǐn)?shù)按以下公式計算,。

NDF (%) = (m2- (m1 x C1)) x 100 / m

其中： m1 為空袋質(zhì)量，g,；m為樣品質(zhì)量,，g；m2 為提取處理后樣品殘渣+濾袋質(zhì)量,，g,；C1 為空白袋子校正系數(shù)(烘干后質(zhì)量/原來質(zhì)量)。