“色譜是一種分離分析手段,,分離是核心,,因此,,擔負分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟,。色譜柱由柱管、壓帽,、卡套(密封環(huán)),、篩板(濾片)、接頭,、螺絲等組成,,沒有色譜柱就不能進行分離、定性與定量了,,色譜柱是根據(jù)柱子里的填充物不同來區(qū)別的,,填充物又是根據(jù)需要分離的物質(zhì)的極性來選擇的。
1.色譜柱的使用說明:
(1)色譜柱使用前注意事項:
色譜柱的儲存液無特殊說明,,均為評價報告所示的流動相,。在使用前,一定要注意色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動相是否互溶,。在反相色譜中,,如,用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑,,應(yīng)先用10%左右的低濃度的有機相洗脫劑過渡一下,,否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機相中很容易析出,堵塞色譜柱,。
(2)流動相:
流動相中所使用的各種有機溶劑要盡可能使用色譜純,,配流動相的水是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動相再經(jīng)過0.45μm的濾膜過濾一次則更好,,尤其是含鹽的流動相,。另外,裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換,。以常規(guī)硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的pH值適用范圍是2.0~8.0,,BDSC18適合于堿性化合物,pH值適用范圍為2.0~10.0,。當必須要在pH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時,,每次使用結(jié)束后立即用適合于色譜柱儲存并與所使用的流動相互溶的溶劑清洗,并*置換掉原來所使用的流動相,。
(3)樣品:
樣品也要盡可能清潔,,可選用樣品過濾器或樣品預(yù)處理柱(SPE)對樣品進行預(yù)處理,;
若樣品不便處理,要使用保護柱,,在用正相色譜法分析樣品時,,所有的溶劑和樣品應(yīng)嚴格脫水。
2.色譜柱的保存:
(1)反相色譜柱每天實驗后的保養(yǎng):
使用緩沖液或含鹽的流動相,,實驗完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘,,洗掉色譜柱中的鹽,再用甲醇沖洗30分鐘,。注意:不能用純水沖洗柱子,,應(yīng)該在水中加入10%的甲醇,防止將填料沖塌陷,。
(2)長期保存色譜柱:
如果色譜柱要長時間保存,,必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中,,正相柱可以儲存于嚴格脫水后的純正己烷中,,離子交換柱可以儲存于水(含防腐劑*或柳硫汞)中,并將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上,,儲存的溫度是室溫,。
3.色譜柱的再生因為色譜柱是消耗品,隨著使用時間或進樣次數(shù)的增加,,會出現(xiàn)色譜峰高降低,,峰寬加大或出現(xiàn)肩峰的現(xiàn)象,一般來說可能是柱效下降,。
(1)反相柱的再生:
依次采用20~30倍的色譜柱體積的甲醇:水=10:90(V/V),,乙腈,異丙醇作為流動相沖洗色譜柱,,完成后再以相反順序沖洗色譜柱,。
(2)正相柱的再生:
依次以20~30倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇,、二氯甲烷,、甲醇作為流動相沖洗色譜柱,,然后再以相反的順序沖洗色譜柱,。要注意上述溶劑必須嚴格脫水。
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