l 本試劑盒用于體外定量檢測血清,、血漿,、組織,、細胞上清及相關(guān)液體樣本中人B7同源體1（B7-H1）的含量。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預先包被人B7同源體1（B7-H1）捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標本、標準品,、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的人B7同源體1（B7-H1）呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度,。

樣本處理及要求

1.  血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃后于1000g離心20分鐘,，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,，但應避免反復凍融,。
2.  血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑,，標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,，但應避免反復凍融,。
3.  細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測,，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,，但應避免反復凍融。
注：標本溶血會影響zui后檢測結(jié)果,，因此溶血標本不宜進行此項檢測,。

需要而未提供的試劑和器材

• 酶標儀（450nm）
• 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL,、20-200uL,、200-1000uL
• 37℃恒溫箱
• 蒸餾水或去離子水

試劑盒組成

備注：

1.  標準品濃度依次為：1000、500,、250,、125、62.5,、0 pg/mL

2.  經(jīng)過大量正常標本檢驗,，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi)，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可,。當有部分樣本值超過zui大標準品濃度時,，可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。

注意事項

• 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果,。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃,。使用后立即冷藏保存試劑。
• 洗板不正確可以導致不準確的結(jié)果,。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體,。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
• 消除板底殘留的液體和手指印,，否則影響OD值,。
• 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不能使用,。
• 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果,。
• 在儲存和溫育時避免強光直接照射。
• 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上,。
• 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體,。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
• 不能使用過期產(chǎn)品。
• 如果可能傳播疾病,，所有的樣品都應管理好,，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。

試劑準備

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用,。

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

操作步驟

1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2.   設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；
3.   樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加。
4.   除空白孔外,，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5.   棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）,。
6.   每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。
7.   每孔加入終止液50μL，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值,。

實驗結(jié)果計算

以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標,，在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線,，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程,，計算出樣品的濃度,。

試劑盒性能

•  檢測范圍：31.25 pg/mL – 1000 pg/mL,。
•  靈敏度：zui低檢測濃度小于1.0 pg/mL,。
•  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。
•  重復性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% ,。