細(xì)胞培養(yǎng)的路上,，有多虐心就有多少要注意的地方,。大家擦干眼淚,，聽(tīng)?zhēng)熃銕拙湓?。希望我所說(shuō)的能幫助你細(xì)胞培養(yǎng)的路上,，少一點(diǎn)污染,，多一點(diǎn)快樂(lè)。

細(xì)胞方面

1. 買(mǎi)細(xì)胞要去靠譜的地方買(mǎi),，比如 ATCC 或者丁香通。一般上面會(huì)有針對(duì)細(xì)胞的介紹,，這樣培養(yǎng)之前可以了解細(xì)胞正常生長(zhǎng)的狀態(tài)圖,、傳代、培養(yǎng)基的類(lèi)型等,。

2. 不管是買(mǎi)的細(xì)胞,，還是別人惠贈(zèng)的細(xì)胞，剛拿到手趕緊的做兩件事：檢測(cè)是否有支原體污染,；迅速擴(kuò)增凍存,，凍存細(xì)胞復(fù)蘇后第二天更換一次培養(yǎng)基。

3. 發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染迅速處理掉,，特別是當(dāng)你養(yǎng)了很多種細(xì)胞時(shí),。細(xì)菌污染,、真菌污染很容易發(fā)現(xiàn)，支原體污染的話,，細(xì)胞會(huì)長(zhǎng)的慢,，可以買(mǎi)個(gè)支原體檢測(cè)的試劑盒定期檢測(cè)一下。

4. 不同細(xì)胞生長(zhǎng)周期不同,。有的生長(zhǎng)很快,，比如說(shuō) MDA-MB-231，傳代的時(shí)候取離心懸液的十分之一就已經(jīng)足夠了,。有的又是特別慢,，比如 BT474，傳代是一分二,，復(fù)蘇起始的時(shí)候兩周多才能長(zhǎng)滿(mǎn),。這就需要要在培養(yǎng)細(xì)胞的過(guò)程中多多摸索。

5. 對(duì)于嬌弱的細(xì)胞,，就得細(xì)心呵護(hù),。胰酶消化不能過(guò)久，吹得時(shí)候要輕柔,，離心時(shí)候也要注意轉(zhuǎn)速和時(shí)間,。每天都要去看一下細(xì)胞，肉眼觀察培養(yǎng)基狀況,、顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況,。記住，是每天,。

操作方面

1. 不要和別人共用試劑耗材,，自己準(zhǔn)備一套。自己的東西自己包自己烘干,。槍頭什么的只要有可能污染就換,。

2. 嚴(yán)格無(wú)菌操作。操作臺(tái)一定要擺個(gè)酒精燈,，所有操作緊密?chē)@在酒精燈周?chē)M(jìn)行,。離開(kāi)過(guò)操作臺(tái)的東西再進(jìn)操作臺(tái)之前一定要用酒精消毒一遍，稍微烤一下,，別直接放到火上,，離一段距離。包括一切實(shí)驗(yàn)耗材,、儀器,、以及你帶著手套的手。

3. 水浴鍋很臟，生化培養(yǎng)箱要是得手動(dòng)加濕的話盤(pán)里的水也會(huì)很臟,，記得要勤換,。身體的各個(gè)部分盡量的少接觸不需要接觸的地方的地方。比如實(shí)驗(yàn)臺(tái),，又比如培養(yǎng)箱內(nèi)部,。培養(yǎng)箱隔一段時(shí)間*用酒精棉擦洗一次。

4. 細(xì)胞房日常的值日清潔是必須的,，此外還要定期熏蒸,。晚上離開(kāi)的時(shí)候給細(xì)胞房照紫外，超凈臺(tái)是用完就開(kāi),。的是同一時(shí)間就你一個(gè)人在細(xì)胞房養(yǎng)細(xì)胞,。

5. 動(dòng)作要既輕柔又有力。動(dòng)作太重會(huì)有一堆一堆的氣泡,，動(dòng)作太輕就吹不下來(lái),。剛開(kāi)始的時(shí)候吹細(xì)胞太痛苦了，稍微一下就起泡,。后來(lái)就是吹的時(shí)候槍里的培養(yǎng)基不要一次全都?jí)撼鰜?lái),，留一點(diǎn)，槍的zui頭部盡量深的在液面以下,。