ELISA 即酶聯(lián)免疫吸附試驗，是一種常用的固相酶免疫測定方法,。Engvall 和 Perlmann 于 1971 年zui先應(yīng)用該法進(jìn)行了 IgG 定量測定，并命名為"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)",。 ELISA 的基本原理是：

①使抗原（或抗體）結(jié)合到某種固相載體表面,，并保持其免疫活性；

②使抗原（或抗體）與某種酶聯(lián)結(jié)成酶標(biāo)抗原（或抗體）,，而且此酶標(biāo)抗原（或抗體）既保留其免疫活性,，又保留其酶活性,；

③ 測定時將受檢標(biāo)本（抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原（或抗體）按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進(jìn)行反應(yīng)，再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其 它物質(zhì)分開,，zui后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢的抗體或抗原量成一定比例,；再加入酶反應(yīng)底物后，底物被酶催化后變?yōu)橛猩a(chǎn)物,，根據(jù)其顏色反應(yīng)的深淺 進(jìn)行定性或定量分析,，以了解被測標(biāo)本中抗體或抗原含量。

ELISA 方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定,。但 ELISA 測定中影響因素較多,，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在臨床檢驗中除正常反應(yīng)外,，有時?？梢姷揭恍╁e誤結(jié)果（即假陽性或假陰性結(jié)果）。引起 ELISA 測定錯誤結(jié)果的原因主要有：

①標(biāo)本因素,；

②試劑因素,；

③操作因素。

本文就標(biāo)本因素對 ELISA 測定的影響做如下討論,。

血清是zui常用的 ELISA 標(biāo)本,，血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本，標(biāo)本引起的假陽性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致,，分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種：

1． 內(nèi)源性物質(zhì)

有人認(rèn)為大約 40% 的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì),，可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子,、補(bǔ)體,、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體,、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠 Ig (s) 抗體,、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。

（1）類風(fēng)濕因子

人血清中 IgM,、IgG 型類風(fēng)濕因子（RF）可以與 ELISA 系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的 FC 段直接結(jié)合,，從而導(dǎo)致假陽性。

解決該情況的辦法有：

①用 F(ab)2 替代完整的 IgG,；

②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性（63℃,，10 min）IgG 的固相吸附劑處理（將熱變性 IgG 加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效）；③檢測抗原時,，可以用 2-巰基乙醇等加入到標(biāo)本稀釋液中,，使 RF 降解。

（2）補(bǔ)體 ELISA 系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過程中,，抗體分子發(fā)生變構(gòu),，其 FC 段的補(bǔ)體 C1q 分子結(jié)合位點被暴露出來,，使 C1q 可以將二者連接起來，從而造成假陽性,。解決的辦法是：①用 EDTA 稀釋標(biāo)本,；②用 53℃，10 min 或 56℃,，30 min 加熱血清使 C1q 滅活,。

（3）嗜異性抗體 人類血清中含有能與嚙齒類動物（如鼠等）Ig (s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體，可將 ELISA 系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來,，也能造成假陽性,。解決的辦法是：可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動物 Ig (s) ，但加入量不足或亞類不同時無效,。

（4）嗜靶抗原的自身抗體 抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體,，有時能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物,，在 ELISA 方法中均可干擾抗原抗體測定結(jié)果。為避免以上情況出現(xiàn),，解決的辦法是：測定前需用理化方法將其解離后再測定,。

（5）醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠 Ig (s) 抗體 臨床開展的用鼠源性 CD3 等單克隆抗體治療，用放射性同位素標(biāo)記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù),，均有可能使這些病人體內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體,；另外，被 鼠等嚙齒類動物咬傷的病人體內(nèi)也可以產(chǎn)生抗鼠 Ig (s) 抗體,。這些病人 ELISA 測定時均可產(chǎn)生假陽性,。解決的辦法是：測定抗原時，在標(biāo)本中加入足量的正常鼠 Ig (s) ,，從而克服由于上述原因造成的假陽性,。

（6）交叉反應(yīng)物質(zhì) 類地高辛、類 AFP 樣物質(zhì)等,，是與靶抗原有交叉反應(yīng)的物質(zhì),。在用多抗測定抗原時對測定結(jié)果影響不大，但在用單克隆抗體測定抗原時,，如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應(yīng)的靶決定簇時,，也會出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

（7）標(biāo)本中其它成分的影響 血清脂質(zhì)過高,、膽紅素,、血紅蛋白及血液粘度過大等，均對 ELISA 測定結(jié)果有干擾作用,。

2． 外源性物質(zhì)

外源性物質(zhì)常常是由于用于 ELISA 測定的血標(biāo)本的采集,、貯存等不當(dāng)所致,。如標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染,、標(biāo)本貯存過久,、標(biāo)本凝集不全和采血管中添加物等影響。

（1）標(biāo)本溶血 由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血,，均可因紅細(xì)胞破壞溶解時釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白,，在以辣根過氧化物酶為標(biāo)記的 ELISA 測定中，會導(dǎo)致非特異性顯色,，干擾測定結(jié)果,。為克服上述干擾作用，標(biāo)本采集時必須注意避免溶血,。

（2）標(biāo)本受細(xì)菌污染 因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶,，因此，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣,，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果,。

（3）標(biāo)本保存不當(dāng) 在冰箱中保存過久的標(biāo)本，血清中 IgG 可聚合成多聚體,、AFP 可形成二聚體,，在間接法 ELISA 測定中會導(dǎo)致本底過深、甚至造成假陽性,；標(biāo)本放置時間過長（如一天以上）,，有時抗原或抗體免疫活性減弱，亦可出現(xiàn)假陰性,。為克服上述干擾,，ELISA 測定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集；如不能立即測定,，5 天內(nèi)測定的血 清標(biāo)本可存放于 4℃,，1 周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存；凍存后融解的標(biāo)本,，蛋白質(zhì)局部濃縮,，分布不均，應(yīng)充分混合后再測定,，但混勻時應(yīng)輕柔,，不可強(qiáng)烈振 蕩。

（4）標(biāo)本凝集不全 在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下,，正常血液采集后 1/2~2 h 開始凝固,，18~24 h *凝固。臨床檢驗工作中,，有時為了爭取時間快速檢測,，常在血液還 未開始凝固時即強(qiáng)行離心分離血清,，此時的血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在 ELISA 測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,，易造成假陽性結(jié)果,；這類情況 于次日復(fù)查時因血凝已*，血清中不再有纖維蛋白原存在,，故復(fù)查結(jié)果變?yōu)殛幮?。為避免上述干擾作用，解決的辦法是血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再 分離血清,，或標(biāo)本采集時用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?/span>

（5）標(biāo)本管中添加物質(zhì)的影響 抗凝劑（如肝素,，EDTA）、酶抑制劑（如 NaN3 可抑制 ELISA 系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性）及快速分離血清的分離膠等均對 ELISA 測定有一定干擾作 用,。 綜上所述,，對臨床檢驗 ELISA 測定中出現(xiàn)的假陽性或假陰性結(jié)果，在考慮試劑因素和操作因素之外,，更多的應(yīng)從標(biāo)本因素方面進(jìn)行分析,，并應(yīng)采取相應(yīng)措施排除 干擾作用，從而為臨床提供正確可靠的檢測結(jié)果,。