在顯微鏡的發(fā)展過程中,，相差鏡觀察法的發(fā)明是近代顯微鏡技術中的重要成就。我們知道,，人眼只能區(qū)分光波的波長（顏色）和振幅（亮度）,。對于無色透明的生物標本，當光線通過時,，波長和振幅變化不大,，在明場觀察時很難觀察到標本。

相差顯微鏡利用被觀察物體的光程差值進行觀察,，也就是利用光的干涉現(xiàn)象,，將人眼不可分辨的相差變?yōu)榭煞直娴恼穹睿词篃o色透明的物質(zhì)也可以清晰可見,。這大大便利了活體細胞的觀察,，因此相差鏡觀察廣泛應用于倒置顯微鏡中。

相差顯微鏡的基本原理是把透過標本的可見光的光程差變成振幅差,，從而提高了各種結構間的對比度,，使各種結構變得清晰可見。光線透過標本后發(fā)生折射,，偏離了原來的光路,，同時被延遲了1/4λ（波長），如果再增加或減少1/4λ，則光程差變?yōu)?/span>1/2λ,，兩束光合軸后干涉加強,，振幅增大或者減少，提高反差,。在結構上,，相差顯微鏡又不同于普通光學顯微鏡，具有兩個特殊之處：

1. 環(huán)形光闌（annular diaphragm）位于光源與聚光器之間,，作用是透過聚光器的光線形成空心光錐,，集聚到標本上。
2. 相位板（annular phaseplate）在物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板,，可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ,，分為兩種：

     ?A+相板：將直射光推遲1/4λ，兩組光波和軸后光波相加,，振幅加大,，標本結構比周圍介質(zhì)更加明亮，形成亮反差（或稱負反差）,。

     ?B+相板：將衍射光推遲1/4λ,，兩組光波和軸后光波相減，振幅變小,，形成暗反差（或稱正反差）,，結構比周圍介質(zhì)更暗。