在顯微鏡的發(fā)展過程中,，相差鏡觀察法的發(fā)明是近代顯微鏡技術(shù)中的重要成就,。我們知道，人眼只能區(qū)分光波的波長（顏色）和振幅（亮度）,。對于無色透明的生物標(biāo)本,，當(dāng)光線通過時，波長和振幅變化不大,，在明場觀察時很難觀察到標(biāo)本,。

相差顯微鏡利用被觀察物體的光程差值進行觀察，也就是利用光的干涉現(xiàn)象,，將人眼不可分辨的相差變?yōu)榭煞直娴恼穹?，即使無色透明的物質(zhì)也可以清晰可見。這大大便利了活體細胞的觀察,，因此相差鏡觀察廣泛應(yīng)用于倒置顯微鏡中,。

相差顯微鏡的基本原理是把透過標(biāo)本的可見光的光程差變成振幅差，從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對比度,，使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見,。光線透過標(biāo)本后發(fā)生折射，偏離了原來的光路,，同時被延遲了1/4λ（波長）,，如果再增加或減少1/4λ，則光程差變?yōu)?/span>1/2λ,，兩束光合軸后干涉加強,，振幅增大或者減少，提高反差,。在結(jié)構(gòu)上,，相差顯微鏡又不同于普通光學(xué)顯微鏡，具有兩個特殊之處：

1. 環(huán)形光闌（annular diaphragm）位于光源與聚光器之間,，作用是透過聚光器的光線形成空心光錐,，集聚到標(biāo)本上。
2. 相位板（annular phaseplate）在物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板,，可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ,，分為兩種：

     ?A+相板：將直射光推遲1/4λ,，兩組光波和軸后光波相加，振幅加大,，標(biāo)本結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加明亮,，形成亮反差（或稱負反差）。

     ?B+相板：將衍射光推遲1/4λ,，兩組光波和軸后光波相減,，振幅變小，形成暗反差（或稱正反差）,，結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更暗,。