鬼筆環(huán)肽染色概述

鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）是一種從毒蘑菇Amanita phalloides中分離出來的多肽物質(zhì)，它能夠與細胞中的肌動蛋白絲（F-actin）結(jié)合,，從而用于細胞骨架的染色,。

鬼筆環(huán)肽與F-actin的結(jié)合是高度特異性的，不會與肌動蛋白單體（G-actin）結(jié)合,，因此它是研究細胞骨架的重要工具,。通過使用熒光標記的鬼筆環(huán)肽，可以在熒光

顯微鏡下觀察細胞中微絲的分布和形態(tài),。

步驟

  1.配制鬼筆環(huán)肽溶液：通常將0.1mg的鬼筆環(huán)肽溶于1ml無水甲醇中（也可以使用DMSO或無水乙醇）,，配成貯存液，并在-20°C避光條件下保存。

    工作液的濃度通常為5μg/ml,，通過將貯存液用PBS稀釋20倍來制備,。

  2.細胞固定：使用3.7%-4%的甲醛或多聚甲醛固定細胞20分鐘，然后用PBS清洗細胞2次,。

  3.染色：加入5μg/ml的熒光標記鬼筆環(huán)肽,，室溫染色30-60分鐘，然后再次用PBS清洗細胞2次,。

  4.細胞核染色：可以使用DAPI或Hoechst等染料對細胞核進行染色,，染色時間通常為10分鐘，之后再次用PBS清洗細胞2次,。

  5.封片：吸去多余水分后,，加入熒光封片液（中性或偏堿性緩沖液加等量甘油），蓋上蓋玻片,，準備在熒光或共聚焦顯微鏡下觀察,。

注意事項

  1.鬼筆環(huán)肽的分子量小，可以輕易穿透細胞膜,，因此通常不需要對細胞進行冷丙酮和Triton X-100處理,。

  2.鬼筆環(huán)肽具有毒性，操作時應戴手套并在通風良好的環(huán)境中進行,。

  3.鬼筆環(huán)肽染色可以與抗體染色結(jié)合使用,，以同時觀察細胞骨架和其他細胞結(jié)構(gòu)。

  4.避免使用含有甲醇或丙酮的固定劑,，因為這些固定劑會破壞肌動蛋白的結(jié)構(gòu),，影響染色效果。

應用

廣泛應用于細胞生物學研究,，包括細胞形態(tài)學,、細胞運動、細胞分裂以及細胞與細胞之間的相互作用等領域,。

通過觀察F-actin的分布,，研究人員可以更好地理解細胞的功能和病理過程。