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大鼠神經(jīng)元原代培養(yǎng)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

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更新時(shí)間:2022-12-23 15:13:21瀏覽次數(shù):1760次

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大鼠神經(jīng)元原代培養(yǎng)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
神經(jīng)元原代培養(yǎng)是將胚胎哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的部分組織,如大腦皮層,、海馬,、脊髓等腦組織直接取出,,再接種培養(yǎng)的方法。目前國(guó)內(nèi),、外有關(guān)神經(jīng)元培養(yǎng)的方法較多,,但在原代培養(yǎng)中神經(jīng)元的純度和產(chǎn)量方面還存在一些急待解決的問(wèn)題。由于神經(jīng)元是一種高度分化的細(xì)胞,,相對(duì)于其它細(xì)胞而言,,神經(jīng)元在體外更難以存活和生長(zhǎng)。因此,,體外培養(yǎng)神經(jīng)元要求的培養(yǎng)方法和營(yíng)養(yǎng)條件均較為特殊,。

大鼠神經(jīng)元原代培養(yǎng)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

一、背景

神經(jīng)元原代培養(yǎng)是將胚胎哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的部分組織,,如大腦皮層,、海馬、脊髓等腦組織直接取出,,再接種培養(yǎng)的方法,。目前國(guó)內(nèi)、外有關(guān)神經(jīng)元培養(yǎng)的方法較多,,但在原代培養(yǎng)中神經(jīng)元的純度和產(chǎn)量方面還存在一些急待解決的問(wèn)題,。由于神經(jīng)元是一種高度分化的細(xì)胞,相對(duì)于其它細(xì)胞而言,,神經(jīng)元在體外更難以存活和生長(zhǎng),。因此,體外培養(yǎng)神經(jīng)元要求的培養(yǎng)方法和營(yíng)養(yǎng)條件均較為特殊,。

神經(jīng)細(xì)胞的體外培養(yǎng)技術(shù)是研究神經(jīng)源性疾病的發(fā)病機(jī)制、進(jìn)程的一個(gè)重要工具,,能很好的,、直觀的反映離體神經(jīng)元的發(fā)育狀況和生理活性,,如何建立一個(gè)穩(wěn)定成熟的神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)體系是神經(jīng)系統(tǒng)疾病體外實(shí)驗(yàn)研究順利進(jìn)行的基礎(chǔ)。隨著基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)及臨床醫(yī)學(xué)研究的逐漸深入,,神經(jīng)細(xì)胞的體外培養(yǎng)技術(shù)在腦損傷,、神經(jīng)障礙性疾病、衰老相關(guān)神經(jīng)疾病方面得到廣泛重視和普及應(yīng)用,。

二,、大鼠神經(jīng)元原代培養(yǎng)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟

(1)75% (體積分?jǐn)?shù))酒精消毒孕鼠,在無(wú)菌條件下取出胎鼠,分離并切取脊髓,置于冷的無(wú)鈣、鎂的HBSS液的平皿中( 下置冰袋),。

(2)解剖顯微鏡無(wú)菌條件下仔細(xì)剝離脊膜及血管,。

(3)用彈簧剪將脊髓剪成1cm3大小,消化液37℃消化15-20min,,每五分鐘振蕩一次,;

(4)去掉上清,加入終止液終止消化,,吹打10-15次,,不能有氣泡,收集上清,,剩余組織再消化一次,。

(5)4℃1000rpm離心10min,棄上清,,加入種植液1重懸,,培養(yǎng)箱內(nèi)差速貼壁30min;

(6)收集上清,,臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù),,按6*105cells/孔種入六孔板(種植液1),37℃,,5%CO2,,95%飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

(7)培養(yǎng)第二天,,全換液更換為種植液2,;

(8)培養(yǎng)第四天,半量換液加入5uM的阿糖胞苷,,24h全量換液,;

(9)之后每周換液兩次。



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