細胞凋亡是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,，由基因控制的細胞自主的有序的死亡,。細胞凋亡與細胞壞死不同，細胞凋亡不是一件被動的過程,，而是主動過程,，它涉及一系列基因的激活、表達以及調(diào)控等的作用,，它并不是病理條件下,，自體損傷的一種現(xiàn)象，而是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動爭取的一種死亡過程,。細胞凋亡是細胞的一種基本生物學(xué)現(xiàn)象,，在多細胞生物去除不需要的或異常的細胞中起著必要的作用,。它在生物體的進化,、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定以及多個系統(tǒng)的發(fā)育中起著重要的作用。細胞凋亡不僅是一種特殊的細胞死亡類型,，而且具有重要的生物學(xué)意義及復(fù)雜的分子生物學(xué)機制,。凋亡是多基因嚴格控制的過程。

Annexin V/PI雙染檢測細胞凋亡：在正常細胞中,，磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè),，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè),。Annexin V是一種Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白,，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結(jié)合,。因此Annexin V被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一,。將Annexin V 進行熒光素標記，以標記了的Annexin V作為熒光探針,，利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發(fā)生,。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜,，但對凋亡中晚期的細胞和死細胞,，PI能夠透過細胞膜而使細胞核染紅,。因此將Annexin V與PI匹配使用，就可以將處于不同凋亡時期的細胞區(qū)分開來,。

二,、實驗流程

1. 細胞培養(yǎng)，接種6孔板,。

2. 誘導(dǎo)細胞凋亡,。

3. 不含EDTA的胰酶消化貼壁細胞并離心收集。

4. 重懸細胞,，加Annexin V/PI染色,。

5. 流式細胞儀檢測。

6. 結(jié)果統(tǒng)計分析,。