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細胞實驗之成年小鼠關節(jié)軟骨細胞原代培養(yǎng)
免疫熒光技術(Immunofluorescence technique)又稱熒光抗體技術,是標記免疫技術中發(fā)展早的一種,。它是在免疫學,、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合,,利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位,。它是根據(jù)抗原抗體反應的原理,先將已知的抗原或抗體標記上熒光基團,,再用這種熒光抗體(或抗原)作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原(或抗體)。利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在的細胞或組織,,從而確定抗原或抗體的性質和定位,。
免疫熒光技術是根據(jù)抗原抗體反應的原理,先將已知的抗原或抗體標記上熒光素,,制成熒光抗體,,再用這種熒光抗體(或抗原)作為探針檢測組織或細胞內的相應抗原(或抗體)。在組織或細胞內形成的抗原抗體復合物上含有標記的熒光素,,利用熒光顯微鏡觀察標本,,熒光素受外來激發(fā)光的照射而發(fā)生明亮的熒光(黃綠色或橘紅色),可以看見熒光所在的組織細胞,,從而確定抗原或抗體的性質,、定位,以及利用定量技術測定含量,。
免疫熒光有直接法和間接法兩種,。(1)直接法:將標記的特異性熒光抗體,直接加在抗原標本上,,經一定的溫度和時間的染色,,用水洗去未參加反應的多余熒光抗體,室溫下干燥后封片、鏡檢,。(2)間接法:如檢查未知抗原,,先用已知未標記的特異抗體與抗原標本進行反應,用水洗去未反應的抗體,,再用標記的抗抗體與抗原標本反應,,使之形成抗原—抗體—抗體復合物,再用水洗去未反應的標記抗體,,干燥,、封片后鏡檢。如果檢查未知抗體,,則表明抗原標本是已知的,,待檢血清為一抗,其它步驟的抗原檢查相同,。標記的抗抗體是抗球蛋白抗體,,同于血清球蛋白有種的特異性。
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