線粒體膜電位檢測實驗原理

 JC-1是一種碳氰化合物類陽離子熒光染料,，可作為檢測線粒體跨膜電位指示劑。JC-1在細胞內以聚合體和單體兩種不同的物理形式存在,，分別處于不同的熒光發(fā)射峰,。當JC-1 濃度低或膜電位水平低時，主要以單體形式存在,，激發(fā)波長為527nm,，呈綠色熒光；當JC-1濃度升高或線粒體膜電位水平較高時,，形成聚合物,，發(fā)出紅色的熒光，激發(fā)波長為590nm,。當細胞發(fā)生凋亡時,，線粒體跨膜電位被去極化，JC-1從線粒體內釋放,，紅光強度減弱,，以單體的形式存在于胞質內發(fā)綠色熒光，根椐這一特征就可以檢測線粒體膜電位的變化,。

線粒體膜電位檢測實驗流程

1. 細胞培養(yǎng),；

2. 用適當?shù)姆椒ㄕT導細胞凋亡,，同時設立陰性依照組合陽性對照組，收集細胞,；

3. 用PBS洗滌細胞三次,，收集不多于1×106的細胞；

4. 取100 μL 10×Incubation Buffer加900μL**去離子水稀釋成1×Incubation Buffer,，混勻并預熱至37℃,；

5. 吸取500 μL 1×Incubation Buffer，加入1μL JC-1,，渦旋混勻配成JC-1工作液,；

6. 取500 μL JC-1工作液將細胞均勻懸浮，37℃,，5% CO2的培養(yǎng)箱中孵育15~20min,。

7. 室溫離心（2000rpm,5min）收集細胞，用1×Incubation Buffer洗兩次,；

8. 吸取500 μL 10×Incubation Buffer重新懸浮細胞,；

9. 流式細胞儀檢測，分析,。

客戶提供

細胞株(凍存株或培養(yǎng)好的細胞),，相關藥品或MMP檢測試劑盒（可代購）

公司提供

實驗步驟、結果圖,、數(shù)據(jù)結果和分析報告

實驗周期：1-2周,，具體需要根據(jù)細胞生長情況及實驗內容而定。