細胞培養(yǎng)服務細胞復蘇

將凍存細胞從液氮中取出后,，在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融化,。移入15ml離心管中，加入10ml預熱的DMEM*培養(yǎng)基,，輕輕吹勻,，離心，2000rpmX2min,，棄上清液,。加入10ml DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液,。加入10ml DMEM*培養(yǎng)基,，輕輕吹打，接種于10cm盤中,，在含5%CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

細胞培養(yǎng)服務細胞傳代

細胞密度達到80%~90%時．去培養(yǎng)基，10ml PBS清洗2次,。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶,，放入細胞培養(yǎng)箱3min。加人1ml DMEM*培養(yǎng)基終止胰酶消化,，轉移至15ml離心管,。加入10ml PBS清洗細胞培養(yǎng)盤，轉移至15ml離心管,，2000rpmX2min,，棄上清液,。再加入10ml PBS（經高壓滅菌，保存于40°C）,，吹勻,，吸取10微升進行計數，按照1×105/盤接種,，在含5%CO2的細胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng),。

細胞凍存

細胞密度達到80%～90%時，去培養(yǎng)基,，10ml PBS清洗2次,。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，放入細胞培養(yǎng)箱3min,。加入lmlDMEM*培養(yǎng)基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管,。加入10ml PBS清洗細胞培養(yǎng)盤,，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min,，棄上清液,。加入1ml凍存液（90%血清，10%DMSO）,，放入凍存盒內（盒內有異丙醇,，以保證溫度降低的速度），立即放入一80℃冰箱內,，過夜,，第二天放入液氮中，可以保存至少兩年,，如不放入液氮,，可以保存三個月。

凍存液的配制：70%的*培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加,，邊滴邊搖,。