脾單核細胞分離實驗操作方法：

采用頸椎脫臼法處死小鼠,，于75%的酒精中浸泡10-15min,；
在無菌超凈臺內分離脾臟,，放入PBS溶液（按照1：50的比例加入雙抗）中清洗2遍,；
將清洗后的脾臟組織轉移至離心管中,，加入適量的RMPI-1640培養(yǎng)基,，用剪刀將其剪碎成糜狀；
將剪碎后的組織經200目的濾網(wǎng)過濾,，得到脾細胞懸液,；
另取一個離心管，先加入與細胞懸液等量體積的淋巴細胞分離液,，之后將細胞懸液輕輕加到離心管的淋巴細胞分離液上層（注意45度傾斜沿管壁滴加,，一定要緩慢否則懸液沉下去導致分層界面不明顯）；
3000rpm離心10min,，離心完畢后吸取中間白膜層即為脾單個核細胞,；
3000rpm離心10min，加入RMPI-1640培養(yǎng)基進行洗滌一次,；
用紅細胞裂解液去除紅細胞,；3000rpm離心10min,，再次用RMPI-1640培養(yǎng)基進行洗滌一次；
洗滌結束后,，所得細胞沉淀用RMPI-1640培養(yǎng)基重懸后進行細胞計數(shù),。