1. 準備0-1天內的C57BL/6J小鼠新生鼠,。

2. 用溫的無菌去離子水，輕輕擦拭每只新生鼠,。

3. 用70%的乙醇去除新生鼠身體上的污染物,。

4. 斷頭，取心臟,，心臟置于冰的PBSG溶液中,。

5. 除去血液和非心臟組織。

6. 剪碎心臟組織,。

7. 加入胰酶-膠原酶消化液,，每只新生鼠75ul。

8. 在37°C的搖床培養(yǎng)箱中,，以250 rpm/ 5 min,，消化心肌組織。

9. 輕輕渦旋,，然后離心10秒,，丟棄第一次消化的上清液,。

10. 開始第二次消化，250 rpm/ 5 min后,，輕輕渦旋,，然后離心10秒，收集上清液到2倍體積的胎牛血清中,。

11. 重復上述消化過程,，共進行8次消化，收集細胞懸液,。

12. 使用沒有包被的10cm大皿,，預種植細胞1h。

13. 1小時后,，將培養(yǎng)皿從培養(yǎng)箱中取出,，移除沒貼壁的細胞及上清液，加入完丨全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。