背景：顱腦外傷（TBI）是世界范圍內(nèi)威脅生命的疾病,。大多數(shù)中國人由于運(yùn)動受傷，辦公室或家中意外摔倒以及摩托車受傷而患有TBI,。由于社會對疾病的了解不多,，因此TBI被稱為“沉默流行病"。 TBI后繼發(fā)性腦損傷引起病理,，生理和生物學(xué)反應(yīng),，導(dǎo)致腦功能障礙。生物和化學(xué)過程通常觸發(fā)連鎖反應(yīng),，可導(dǎo)致炎癥細(xì)胞,，能量缺乏，興奮性毒性,，細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激,。氧化應(yīng)激在上述過程中起重要作用。氧化會增強(qiáng)炎癥和其他反應(yīng),，因此促進(jìn)炎癥和其他反應(yīng)會加劇氧化應(yīng)激并形成惡性循環(huán),。氧化應(yīng)激在TBI后一小時發(fā)生，并立即成為病理反應(yīng),。因此,，抗氧化劑策略是治療急性TBI的關(guān)鍵。由于神經(jīng)膜的簡單過氧化作用,，大腦容易受到氧化損傷,。它們富含脂肪酸，容易被氧化,，大腦組織需要大量的氧氣,。它占總耗氧量的20％。大腦富含脂質(zhì)，使其更容易受到自由基的破壞,?；钚匝酰≧OS），例如超氧陰離子,，羥基自由基和過氧化氫（H2O2）,，被認(rèn)為是參與細(xì)胞生長和分化信號傳遞的第二信使。如果ROS的產(chǎn)生和去除不平衡,，則會釋放生物系統(tǒng)中的氧化應(yīng)激,。過量的ROS產(chǎn)生是在TBI發(fā)展中引起氧化應(yīng)激的重要因素。細(xì)胞在有氧環(huán)境中產(chǎn)生過氧化氫,，超氧陰離子,，羥基自由基和其他活性氧。這些自由基可以與生物分子相互作用,，例如DNA,，碳水化合物，蛋白質(zhì),，脂質(zhì),，并破壞各種細(xì)胞成分。大腦富含抗氧化酶,，例如過氧化氫酶（CAT）,，超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH），可防止氧化損傷,。同時,，丙二醛（MDA）和谷胱甘肽（GSSG）在腦組織中引起氧化應(yīng)激。在氧化條件下,，兩個GSH分子提供電子并將其轉(zhuǎn)換為GSSG,。 GSH/GSSG摩爾比是很強(qiáng)的氧化應(yīng)激和疾病風(fēng)險指數(shù)。不幸的是,，TBI的治療效果遠(yuǎn)不能令人滿意,，因為其病因是由高度復(fù)雜和相互作用的機(jī)制觸發(fā)的。西藥的抗氧化策略失敗了,?？茖W(xué)家已經(jīng)開始從中草藥中尋找具有潛在創(chuàng)新性的植物成分，以進(jìn)行抗氧化劑治療,。近年來,，大黃有效地預(yù)防了由嚴(yán)重腦損傷引起的腦功能障礙。大黃具有抑制大鼠腦組織脂質(zhì)過氧化的作用,。大黃可以顯著減少DNA段化,，這在乳酸脫氫酶釋放和細(xì)胞凋亡中起關(guān)鍵作用,。近年來，大黃已被用于治療腦部創(chuàng)傷并取得了令人滿意的結(jié)果,。大黃作為大黃中重要的活性成分,，具有豐富的有效氧化特性。但是,，TBI治療的機(jī)制仍不清楚,。因此，本研究旨在確定大黃酸的抗氧化作用,，并進(jìn)一步確定大黃酸是否可以用作大黃的靶向治療材料來治療TBI,。

      方法：動物和外科手術(shù)：在標(biāo)準(zhǔn)溫度22±2℃，12-12明暗循環(huán),，相對濕度50±10％的標(biāo)準(zhǔn)條件下飼養(yǎng)200-300g雄性SD大鼠,。試驗前12小時不給大鼠喂食，但給它們充足的水,。將108只SD大鼠隨機(jī)分為6組,，每組分別在3個時間點（8、16和24小時）進(jìn)行功效測試：（1）對照組：TBI后對大鼠進(jìn)行灌胃通過氯化鈉（n = 6）給予等量的生理鹽水（0.9％）,；（2）假手術(shù)組：大鼠進(jìn)行了相同的手術(shù),，只是大腦皮層完整（ ＝ 6）；（3）12g/kg大黃治療組：同一創(chuàng)傷大鼠口服大黃（n ＝ 6）,；（4）6g/kg大黃組：同一創(chuàng)傷大鼠后口服大黃。 （N ＝ 6）,；（5）3g/kg大黃組：在相同的外傷大黃組之后對大鼠口服大黃（n ＝ 6）,；（6）12mg/kg的雨水組：在對大鼠相同的外傷后口服（n = 6）。皮層電刺激（CCI）用于建立大鼠顱腦損傷模型,。用麻醉雄性SD大鼠,，并用3D火焰氣錘操作。此后,，在顱骨右側(cè)的中央空間側(cè)進(jìn)行手術(shù),，用手上的環(huán)戊烷打開前reg和λ之間的中心，僅損傷實驗大鼠的腦表面的一側(cè),。損壞指數(shù)的碰撞深度為5毫米,，持續(xù)500毫秒，每秒6米,。我們還對對照大鼠進(jìn)行了開顱手術(shù),，但并未損害大鼠大腦。然后縫合傷口,，將大鼠蘇醒并放置在加熱墊上30-60分鐘以維持正常的體溫,。每天觀察受傷的小鼠至少4個小時,。

     UPLC-MS/MS檢測CCI大鼠腦組織中的大黃酸：向CCI大鼠口服大黃以測量腦組織中吸收的化合物，并通過UPLC-MS/MS測定離子峰和保留時間我測量了將大黃（3 g/kg,，6 g/kg,，12 g/kg）和大黃酸（12 mg/kg）灌胃給予CCI大鼠。胃內(nèi)給藥后,，在第8,、16和24小時處死每組大鼠。將大鼠麻醉并以400 mg/kg的劑量腹膜內(nèi)注射10％水合氯醛,。 30分鐘后,，處死動物，收集腦樣本,，用足夠的冰冷的DD水洗滌腦組織樣本,，然后加入4 ml冰甲醇進(jìn)行勻漿。在4°C下以3000pm離心勻漿10分鐘,。離心后,，將混合物蒸發(fā)至干，并在37℃下用氮氣回收上清液,。提取液用200μL20％甲醇溶解,，溶液在4°C下以15000pm離心15分鐘。離心后,，用0.22μm尼龍過濾器過濾上層,。將5μL注入UPLC-MS/MS系統(tǒng)并進(jìn)行分析。

      估計氧化和抗氧化狀態(tài)：用考馬斯亮藍(lán)法測量超氧化物歧化酶活性：使用試劑盒測量總SOD活性,。在450nm的波長下測量液體的吸光度,。活性通過蛋白質(zhì)的量校正,，并表示為控制時間,。讀取450m處的吸光度，并使用以下公式計算SOD活性：[（對照值的空白值）-（樣品的空白值）] /（對照值的空白值）x 2 x（總體積/體積）/蛋白質(zhì)濃度,。使用mg/mg蛋白表達(dá)SOD活性,。

      過氧化氫酶活性的測量：根據(jù)測試試劑盒的說明書測量CAT的活性。在450m波長下測量測試溶液的吸光度,。使用摩爾Mmol過氧化氫消耗/分鐘/ mg來表達(dá)酶活性,。

      MDA含量測定：使用試劑盒測定MDA。要確定MDA含量,，請使用（TBA）方法,。谷胱甘肽活性和氧化型谷胱甘肽水平的測量：活性谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽均根據(jù)GSH/GSSG檢測試劑盒進(jìn)行操作。 10分鐘后,，在分光光度計上記錄405m的吸光度并計算GSH/GSSG比,?？侴SH含量表示為μmol/ mg蛋白質(zhì)。結(jié)果：抗氧化測試作用Rhubarb和Lein顯著增加了CCI大鼠腦組織中的SOD水平：與假手術(shù)組相比,，CCI大鼠的SOD活性明顯降低,。與對照組相比，在不同時間點（16小時和24小時）,，大黃（12 g/kg）和大黃酸（12 mg/kg）顯著增加了SOD水平,。與對照組相比，在大黃（6 g/kg）的不同時間點（16 h和24 h）,，SOD水平顯著增加,。與車輛組相比，雨水（12 mg/kg）在8小時內(nèi)增加了SOD含量,。大黃（3g/kg和6g/kg）在8小時時與載劑組相比沒有統(tǒng)計學(xué)意義,。hubarb和Rein顯著增加CCI大鼠腦組織中的CAT水平：與假手術(shù)組相比，CCI大鼠中CAT活性顯著降低,。結(jié)果表明,，大劑量大黃（12g/kg）和16h大黃酸（12mg/kg）分別在8h和16h后顯著增加了CAT活性。與媒介物組相比,，該線（12 mg/kg）在不同時間點（8小時和24小時）增加了CAT水平,。在不同時間點（8、16,、24小時）,，大黃（3 g/kg）與對照組相比沒有統(tǒng)計學(xué)意義。大黃和大黃酸可以顯著降低CCI大鼠腦組織的MDA含量：與假手術(shù)組相比,，CCI大鼠的腦MDA含量顯著增加,。高劑量大黃（12g/kg）和大黃酸（12mg/kg）16和24小時后，MDA活性顯著降低,。與治療組相比,，大黃（6g/kg）和大黃酸（12mg/kg）可以在16小時和24小時時顯著降低MDA含量（12mg/kg）,。大黃（3g/kg,，6g/kg）在8小時內(nèi)與賦形劑組相比沒有統(tǒng)計學(xué)意義。最大的變化發(fā)生在24小時內(nèi),。hubarb和Rein顯著增加CCI大鼠腦組織中的GSH含量和GSH/GSSG比,。腦損傷可降低CCI大鼠的GSH含量和GSH/GSSG比，并增加GSSG,。結(jié)論：線是大黃灌胃后CCI大鼠大腦中的活性成分,。該產(chǎn)品線與大黃在創(chuàng)傷性腦損傷治療中的抗氧化能力相似（通過增加SOD，CAT活性,，GSH水平和GSH/GSSG比,，以及降低MDA和GSSG）,。

      結(jié)果表明，大黃和大黃酸可以作為神經(jīng)保護(hù)劑治療TBI,。