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上海元析儀器有限公司

紫外可見分光光度計(jì)定量,、定性分析需注意的問題

時(shí)間:2018-3-21 閱讀:3047
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       使用紫外可見分光光度計(jì)進(jìn)行定量和定性分析需注意以下一些問題: 

  吸光度讀數(shù)范圍:吸光度測量誤差在透過率過大或過小時(shí)都會(huì)變大,,為了滿足定量分析的誤差要求<5%),,在定量分析時(shí)要求吸光度應(yīng)在一定的范圍內(nèi),,這個(gè)范圍的具體值與儀器性能有關(guān),,主要是與紫外可見分光光度計(jì)檢測系統(tǒng)噪聲大小有關(guān),但通常都在0.1~1.0范圍內(nèi),,如果儀器的檔次更低,,則范圍更窄。根據(jù)朗伯比爾定律,,影響吸光度大小的因素主要是樣品摩爾吸光系數(shù),,濃度和比色皿光程,。實(shí)驗(yàn)中吸光度過大的樣品可通過稀釋樣品使吸光度到所需范圍內(nèi)。如果樣品不能稀釋,,可以改用光程較小的比色皿減小吸光度,。吸光度過小的樣品可使用光程較大的比色皿以增大吸光度。

  吸收波長的選擇:進(jìn)行單波長測量時(shí),,需要考慮朗伯比爾定律對(duì)入射光單色性的要求和測定靈敏度的要求,。沒有干擾時(shí),一般選擇在吸收峰的zui大吸收波長位置處,,如果有干擾,,選擇在沒有干擾且吸光度變化較平緩的位置。 進(jìn)行多波長校正時(shí),,除盡量滿足單波長測定的波長要求外,,還要求多個(gè)組分間的吸收光譜間線性無關(guān)。 

  狹縫的選擇:狹縫的大小會(huì)影響到儀器的信噪比和標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍,。狹縫過大,,通常會(huì)使線性范圍變小,特別是當(dāng)不在zui大吸收波長位置測定時(shí)更是如此,。狹縫過小,,信噪比變差,基線平直度和測量數(shù)據(jù)的重復(fù)性會(huì)變差,。此外,,還需要考慮樣品吸收峰寬度的影響。通常單波長測定時(shí),,一般選擇在zui大吸收波長位置,,線性范圍容易滿足,可選擇較寬的狹縫(1~2nm)多波長測定時(shí),,很難同時(shí)在所有波長都滿足線性范圍要求,,應(yīng)選擇較小的狹縫。 

  重復(fù)測定次數(shù)和波長掃描速度:對(duì)吸光度不是很大的樣品,,或者狹縫不是很小,,這是檢測器檢測的光信號(hào)的強(qiáng)度是比較大的,重復(fù)性較好,,可選擇較少的重復(fù)次數(shù),。相反,如果樣品吸光度很大,,狹縫很小,,選擇較大的重復(fù)次數(shù)可獲得更好的結(jié)果。 

  測定波長間隔:在掃描光譜時(shí)需要選擇,,可根據(jù)樣品吸收峰的寬度進(jìn)行選擇,,峰寬較大時(shí),,可選擇較大的波長間隔。反之亦反,。通常每個(gè)正常的吸收峰應(yīng)該用不少于30個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)表示出來,。

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