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二惡英檢測方法比較（一）
二惡英化合物（簡稱二惡英）是劇毒有機污染物。人體長期低劑量接觸,，會導(dǎo)致癌癥,、雌性化,、胎兒畸形,、糖尿病等疾病,。自比利時發(fā)生二惡英食品污染事件和《POPs公約》在瑞典斯德哥爾摩簽署以來，二惡英檢測與污染防治在上受到越來越廣泛的關(guān)注[1],。二惡英檢測屬超痕量,、多組分檢測，對特異性,、選擇性和靈敏度要求*,，被認為是當(dāng)代化學(xué)分析領(lǐng)域的一大難點。
美國較早開展二惡英檢測研究,，現(xiàn)已制定出一系列的檢測標準,。歐洲和日本也相繼研究和制定了二惡英檢測標準方法。我國目前正處于二惡英基礎(chǔ)研究的起步階段,，尚未提出相關(guān)檢測標準和方法,，因此亟待建立符合我國國情的二惡英檢測方法和體系。
2 二惡英檢測方法
2.1化學(xué)儀器分析方法
在200余種異構(gòu)體中分離出17種有明顯毒性的二惡英 ,，分別測定其濃度或含量,。將濃度或含量乘以每種二惡英的毒性因子（TEF）就可以得到總毒性當(dāng)量（TEQ）。該方法的一般程序包括采樣,、提取,、凈化、定性定量,。
2.1.1 采樣
樣品的取樣量由樣品類型,、污染水平和方法的檢測限而定。各國對采樣程序都單獨編制了標準方法,。
2.1.2 提取
為了測定提取凈化效率和校正分析丟失,，首先加入17種13C－PCDD/Fs采樣內(nèi)標和37Cl－2,3,7,8－TCDD凈化內(nèi)標。溶劑選擇和提取步驟取決于樣品類型和凈化方法,，如在處理廢棄物焚燒飛灰時溶劑選取石油醚/甲苯/二氯甲苯,，在處理脂肪樣品時溶劑選取二氯甲烷/己烷。提取步驟一般包括溶解,、振蕩,、混勻和萃取。索氏萃取是傳統(tǒng)的提取方法,，廣泛應(yīng)用于檢測飛灰,、魚、牛乳和脂肪組織樣品中的二惡英,。目前,，超臨界流體萃取裝置（SFE）,、加壓加熱型的高速溶劑萃取裝置（ASE）和微波萃取方法也用于提取樣品中的二惡英，并有大量對比實驗證明了這些方法的有效性[3,4],。
2.1.3 凈化
為了除去大量干擾物質(zhì),，目前大多采用色譜法進行凈化。色譜法通常將分配處理柱和色譜柱串聯(lián)使用,，包括酸或堿處理,、硅膠柱、氧化鋁柱,、佛羅里柱和活性炭柱的二次凈化,，具體操作因樣品類型和基質(zhì)性質(zhì)而異。目前,，一些實驗室正在開發(fā)一次性多層柱（如微型氧化鋁柱）和HPLC凈化方法來簡化凈化過程,。凈化后要加入15種13C－PCDD/Fs定量內(nèi)標和2個13C標記的用于確定色譜保留時間的內(nèi)標[5]。
2.1.4 定性定量
通常定性檢測采用2類不同極性的色譜柱,。首先用非極性或弱極性固定相將氯原子取代數(shù)相同的二惡英化合物分為1組,，然后用極性固定相分離其中的異構(gòu)體，zui后通過對17 種標記的和未標記的標準樣品實施比較,，獲取保留時間,。定量檢測主要采用選擇離子監(jiān)測技術(shù)（SIM），以13C穩(wěn)定同位素為內(nèi)標,，根據(jù)測量目的用質(zhì)量校正程序校正質(zhì)譜模式,、分辨率（M/∆M=10,000以上，10％谷峰）等,，并儲存質(zhì)量校正結(jié)果,。對氯不同取代程度的異構(gòu)體分別定量。儀器可選擇高分辨質(zhì)譜儀（HRMS）,、四級桿低分辨質(zhì)譜儀（LRMS）,。
2.2 生物學(xué)檢測方法
目前建立的生物學(xué)檢測方法均是通過對 Ah受體活化程度的測定來間接表達二惡英的TEQ。
2.2.1 EROD細胞培養(yǎng)法
二惡英與Ah受體結(jié)合活化后,，被Ah受體核轉(zhuǎn)位因子（ARNT）轉(zhuǎn)移到細胞核內(nèi),，活化的核內(nèi)基因是特異性DNA片段即二惡英響應(yīng)因子（DRE）。啟動發(fā)揮毒性的基因并增加其轉(zhuǎn)錄,，從而激活EROD酶的活性,。所以通過測定EROD酶的活性，可以了解二惡英激活A(yù)h受體的能力,，進而獲得測試樣品中二惡英的 TEQ[6],。
2.2.2 螢光素酶方法
該方法是將螢火蟲螢光素酶作為報告基因結(jié)合到控制轉(zhuǎn)錄的DRE上，制備成質(zhì)粒載體并轉(zhuǎn)染H4IIE大白鼠肝癌細胞系（含Ah受體傳導(dǎo)途徑的各個部件）,。以此構(gòu)成的CALUX系統(tǒng)螢光素酶誘導(dǎo)活性與二惡英 的毒性系數(shù)相對應(yīng),，zui終測定的結(jié)果也是TEQ[6]。
2.2.3 EIA酶免疫方法
該方法是根據(jù)鼠單克隆抗體DD3與二惡英結(jié)合的特點而建立的競爭抑制酶免疫方法,。使用酶競爭配合物（HRP）和樣品中二惡英共同競爭有限的DD3抗體的特異性結(jié)合位點,以一系列不同濃度的 2,3,7,8－TCDD為標準物質(zhì),，作出2,3,7,8-TCDD標樣與對應(yīng)樣品的劑量－效應(yīng)曲線，樣品中二惡英毒性強度以計算出的TCDD毒性等價濃度間接表示,。zui終通過測定DD3與HRP螯合物的熒光強度來獲取二惡英的TEQ,。螯合物的熒光強度與二惡英的TEQ成反比[7]。
2.2.4 DELFIA熒光免疫法
DELFIA（Dissociation-enhancement Lanthanide Fluoro Immunoassay）法屬于時間分辨熒光免疫分析法,。該方法利用生物基因技術(shù)選擇出合適的抗原鍵合銪離子與樣品中二惡英競爭單克隆抗體,，待免疫反應(yīng)*后加入熒光增強液,使銪離子從抗原中解離下來，進入增強液,形成膠束,，地發(fā)出熒光,。螯合物zui終用時間分辨熒光法分析，其熒光強度與二惡英的TEQ成反比[8],。