H.Pylori IgG ELISA

原理

• 間接法：將幽門(mén)螺桿菌抗原包被在微孔板表面，加入待檢血清樣本后,，如果樣本中存在幽門(mén)螺桿菌特異性 IgG 抗體,，抗體就會(huì)與包被的抗原結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后,，加入酶標(biāo)記的抗人 IgG 抗體,，它會(huì)與已結(jié)合在抗原上的 IgG 抗體結(jié)合，形成 “抗原 - IgG 抗體 - 酶標(biāo)抗 IgG 抗體" 復(fù)合物,。加入底物后,，酶催化底物發(fā)生顯色反應(yīng)，顏色的深淺與樣本中幽門(mén)螺桿菌 IgG 抗體的含量成正比,。通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度值,，與標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ毡容^,，即可判斷樣本中是否存在幽門(mén)螺桿菌 IgG 抗體以及抗體的含量,。

操作步驟

• 樣本采集與處理：采集靜脈血，待血液自然凝固后,，離心分離血清,。血清樣本應(yīng)在 2℃-8℃下保存，若不能及時(shí)檢測(cè),，需置于 - 20℃或更低溫度保存,。

• 加樣：將標(biāo)準(zhǔn)品,、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照和處理后的樣本加入到包被有幽門(mén)螺桿菌抗原的酶標(biāo)板孔中,，通常每孔加入一定量的樣本或標(biāo)準(zhǔn)品,，如 50μl 或 100μl，然后將酶標(biāo)板放入 37℃恒溫箱中孵育一定時(shí)間,，一般為 30 分鐘至 1 小時(shí),。

• 洗滌：孵育結(jié)束后，棄去孔內(nèi)液體,，用洗滌液沖洗酶標(biāo)板,，通常洗滌 3-5 次，以去除未結(jié)合的物質(zhì),。

• 加酶標(biāo)抗體：向每孔中加入酶標(biāo)記的抗人 IgG 抗體,，再將酶標(biāo)板放入 37℃恒溫箱中孵育，時(shí)間一般為 30 分鐘左右,。

• 再次洗滌：重復(fù)洗滌步驟,，去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。

• 顯色：加入底物溶液,，如四甲基聯(lián)苯胺（TMB）,，在酶的作用下底物發(fā)生顯色反應(yīng)，一般在室溫下避光反應(yīng) 15-30 分鐘,，反應(yīng)后溶液會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色,。

• 終止反應(yīng)：加入終止液，如硫酸溶液,，終止顯色反應(yīng),，此時(shí)溶液顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。

• 讀數(shù)：用酶標(biāo)儀在特定波長(zhǎng)下,，如 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度值,。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再根據(jù)樣本的吸光度值從標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算出樣本中幽門(mén)螺桿菌 IgG 抗體的含量或判斷樣本的陰陽(yáng)性,。

臨床意義

• 診斷幽門(mén)螺桿菌感染：若檢測(cè)結(jié)果顯示血清中幽門(mén)螺桿菌 IgG 抗體陽(yáng)性,，表明患者曾經(jīng)感染過(guò)幽門(mén)螺桿菌。但不能區(qū)分是現(xiàn)癥感染還是既往感染,，因?yàn)橛拈T(mén)螺桿菌被gen除后,，抗體水平下降緩慢，一般 1-2 年才能轉(zhuǎn)陰1,。

• 流行病學(xué)調(diào)查：由于該檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)便,、成本相對(duì)較低，可用于大規(guī)模人群的幽門(mén)螺桿菌感染流行病學(xué)調(diào)查,，了解不同地區(qū),、不同人群的幽門(mén)螺桿菌感染率,。

• 治療效果評(píng)估輔助：在幽門(mén)螺桿菌gen除治療后，定期檢測(cè) H.Pylori IgG 抗體水平,，若抗體水平逐漸下降,，提示治療有效；若抗體水平持續(xù)不降或升高,，可能提示治療失敗或存在再次感染,，但不能僅以此作為判斷依據(jù)，還需結(jié)合其他檢查方法,。