| 供貨周期 |
一個(gè)月 |
應(yīng)用領(lǐng)域 |
化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
人可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體試劑盒，用于檢測(cè)多樣人樣本中該受體含量,，基于雙抗夾心 ELISA 法,。操作規(guī)范細(xì)致，從樣本處理到讀數(shù)多環(huán)節(jié)有注意要點(diǎn),，保障結(jié)果準(zhǔn)確,。
人可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體試劑盒介紹
人可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體試劑盒,，在醫(yī)學(xué)研究與臨床診斷領(lǐng)域發(fā)揮著關(guān)鍵作用，主要用于精準(zhǔn)檢測(cè)人血清,、血漿,、組織勻漿以及細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本中的可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體（sTfR）含量。通過(guò)對(duì) sTfR 含量的測(cè)定,，能夠?yàn)樵u(píng)估人體鐵代謝狀態(tài),、診斷缺鐵性貧血等相關(guān)疾病提供重要依據(jù) 。
一,、檢測(cè)原理
該試劑盒多采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）原理 ,。在試劑盒的酶標(biāo)板孔內(nèi)，預(yù)先包被有針對(duì)人 sTfR 的特異性捕獲抗體,。當(dāng)開(kāi)展檢測(cè)時(shí),，將標(biāo)準(zhǔn)品與待測(cè)樣本依次加入酶標(biāo)板孔中。樣本中的 sTfR 會(huì)迅速與包被在孔壁上的捕獲抗體特異性結(jié)合,。溫育一段時(shí)間,，使結(jié)合反應(yīng)充分進(jìn)行后，通過(guò)洗滌操作去除未結(jié)合的雜質(zhì)成分,。隨后,，加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體，該抗體能夠與已經(jīng)結(jié)合在捕獲抗體上的 sTfR 再次特異性結(jié)合,，從而形成 “捕獲抗體 - sTfR - 酶標(biāo)檢測(cè)抗體" 的穩(wěn)固免疫復(fù)合物 ,。再次洗滌，以清除未參與反應(yīng)的多余酶標(biāo)檢測(cè)抗體,。緊接著,，向各孔中添加底物 TMB。在 HRP 的催化作用下,，原本無(wú)色的 TMB 底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng),，逐步轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)色產(chǎn)物 。反應(yīng)持續(xù)一段時(shí)間后,，加入終止液,，使反應(yīng)迅速停止，此時(shí)溶液顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色 ,。由于溶液顏色的深淺程度與樣本中 sTfR 的含量呈正相關(guān)關(guān)系,，借助酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)量各孔溶液的吸光度（OD 值），并依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的 OD 值繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),，即可精準(zhǔn)推算出待測(cè)樣本中 sTfR 的濃度 ,。
二、操作步驟
樣本準(zhǔn)備：血清樣本采集后,，需在 1000×g 的條件下離心 10 分鐘,，小心分離出血清,；血漿樣本同樣按此離心條件處理；細(xì)胞上清液則需以 1000×g 離心 10 分鐘,，去除其中的顆粒和聚合物,；組織勻漿要先將組織與適量生理鹽水混合搗碎，再經(jīng) 1000×g 離心 10 分鐘,，取上清液備用 ,。若樣本不立即使用，應(yīng)分成小份,，在 - 70℃環(huán)境下保存,，防止反復(fù)凍融，使用前需在室溫下充分解凍并確保均勻 ,。
試劑準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒后,，需將所有試劑在室溫下平衡至穩(wěn)定狀態(tài)，并充分混勻 ,。同時(shí),，依據(jù)實(shí)驗(yàn)所需檢測(cè)的樣本數(shù)量，確定酶標(biāo)板的使用條數(shù),，標(biāo)準(zhǔn)品孔和空白孔建議設(shè)置復(fù)孔,，以提高檢測(cè)準(zhǔn)確性 ,。
加樣：在酶標(biāo)板上精確設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔,、空白孔與待測(cè)樣本孔。向標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入 50μL 已稀釋好的不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品,；待測(cè)樣本孔加入 50μL 處理好的樣本,；空白孔則不加任何試劑 。加樣完成后,，立即向各孔中加入 50μL 生wu素標(biāo)記的抗體,，隨后蓋上膜板，輕輕振蕩使其充分混勻,，在 37℃環(huán)境下溫育 45 分鐘 ,。
溫育與洗滌：溫育結(jié)束后，甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿(mǎn)洗滌液,，振蕩 30 秒后甩去洗滌液，并用吸水紙拍干,，此洗滌操作需重復(fù) 4 次,。若使用洗板機(jī)，洗滌次數(shù)應(yīng)增加一次 ,。
后續(xù)反應(yīng)與檢測(cè)：每孔加入 100μL 親和鏈酶素 - HRP,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育 30 分鐘。再次重復(fù)上述洗滌步驟 ,。接著,，每孔加入底物 A、B 各 50μL,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育 5 分鐘 。之后,，迅速向每孔加入 50μL 終止液,，加入終止液后應(yīng)立即使用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的 OD 值 。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),，計(jì)算出樣本中 sTfR 的濃度,，若樣本進(jìn)行過(guò)稀釋?zhuān)€需乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)得到實(shí)際濃度 。
三,、注意事項(xiàng)
試劑盒中的所有試劑在使用前必須充分平衡至室溫,，避免因溫度差異影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性 。
樣本采集,、處理過(guò)程務(wù)必嚴(yán)格遵循規(guī)范操作,，防止樣本受到污染或發(fā)生溶血、脂血等情況,，以免干擾檢測(cè)結(jié)果 ,。
洗滌過(guò)程至關(guān)重要，既要確保充分去除雜質(zhì),，又要避免過(guò)度洗滌導(dǎo)致已結(jié)合的物質(zhì)脫落 ,。
加樣操作要精準(zhǔn)、迅速,，盡量縮短各孔之間的加樣時(shí)間間隔,，保證實(shí)驗(yàn)條件的一致性 。
實(shí)驗(yàn)完成后,，應(yīng)盡快讀取 OD 值,，避免因時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)偏差 。
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