人β-促脂素試劑盒

　人β-促脂素試劑盒客戶收到細(xì)胞先不開蓋,，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時的培養(yǎng)基拍一張照片,，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,，顯微鏡下拍細(xì)胞100X,，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況,；

　　收到細(xì)胞未開封,，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費發(fā)送一株細(xì)胞。

　　二、如為貼壁細(xì)胞,，請在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度：

　　1. 未超過80%匯合度時,，用75%酒精（建議配置75%酒精的水也是滅菌超純水，噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi),，嚴(yán)格無菌操作,；然后打開蓋子，先把培養(yǎng)基吸出10ml左右,，放在離心管里,，然后瓶口過火（嚴(yán)禁直接傾倒），這樣可以保證不污染,，再用10ml的移液管,，將剩余的培液全部吸出，放于離心管中,，培養(yǎng)瓶中只剩余10ml左右培液就可以了,。培養(yǎng)16hr(時間根據(jù)細(xì)胞生長情況調(diào)整）之后，傳代或者凍存,。

　　2. 超過80%匯合度時,，請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

　　1) 棄去培養(yǎng)液,，用3ml PBS（不含鈣,，鎂離子）洗1-2次；

　　2) 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于T25培養(yǎng)瓶中,，倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱,，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓分散,，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶，細(xì)胞隨即脫落下來,；

　　3) 加入6-8ml*培養(yǎng)基,，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中,，按要求分瓶,。

　　三、如為懸浮細(xì)胞,，吸出培養(yǎng)液,，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，吸出上清,，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。

　　注意：換液時一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的,，以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長不好,。

　　四、細(xì)胞出現(xiàn)問題,，可重發(fā)的情況有哪些,？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？

　?。?）細(xì)胞運輸途中遭遇的各種問題,，細(xì)胞丟失、破損,、漏液等,，重發(fā)；

　?。?）凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后,，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，重發(fā),；

　?。?）存活的細(xì)胞靜置24小時后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,，重發(fā),；

　　（4）凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后或存活的細(xì)胞靜置4小時后并且未開封,，出現(xiàn)污染,，重發(fā)；

　?。?）視具體情況而定,。　

　　Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌,；部分產(chǎn)品現(xiàn)貨,，超低比價，另常備 Trizol DMSO lipo2000 lipo3000 SC-2004 SC-2005常備現(xiàn)貨 ,；貨期短,，價格優(yōu)，售后齊全,。

　　  細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)3個原則：1,、用自己的一套試劑，不要和別人混用,；2,、勤觀察細(xì)胞,，像養(yǎng)寵物一樣喜愛和關(guān)心；3,、有規(guī)律地?fù)Q液和傳代,，不要“三天打魚，兩天曬網(wǎng)”,。
　　質(zhì)量可靠,，售后有保障

　　★我?guī)旒?xì)胞近3000種，來源于美國ATCC,細(xì)胞都是經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)量控制,。

　　凍存細(xì)胞時間為5-7個工作日,，活細(xì)胞為7-15個工作日。

　　★由于細(xì)胞庫現(xiàn)有細(xì)胞類目多,，為了不出現(xiàn)混亂錯誤,，需要了解相關(guān)細(xì)胞價格及詳細(xì)資料請老師，對您造成的不便還請見諒,！

一,、細(xì)胞的復(fù)蘇：
非原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般凍存于液氮之中，需要培養(yǎng)時要先從液氮中取出使之復(fù)蘇,。細(xì)胞復(fù)蘇的原則——快速融化：必須將凍存在－196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃,，使細(xì)胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶,，對細(xì)胞造成損害,。
具體操作如下：
1、實驗前準(zhǔn)備：
1.1,、將水浴鍋預(yù)熱至37℃,，并將含10%FBS的培養(yǎng)液置于其中預(yù)熱；
1.2,、用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面,。
1.3、在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管,、吸管,、培養(yǎng)瓶等等。
2,、取出凍存管及迅速解凍：
2.1,、根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號。
2.2,、從液氮罐中取出細(xì)胞盒,，取出所需的細(xì)胞，同時核對管外的編號,。
2.3,、迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍,，并要不斷的搖動，使管中的液體迅速融化,，約1-2min后凍存管內(nèi)液體*溶解,，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,，再拿入超凈臺內(nèi),。
3、平衡離心 將細(xì)胞懸液吸到離心管中,，1000～1500rpm離心3分鐘,；
4、制備細(xì)胞懸液 吸去上清液,，加入10 ml培養(yǎng)液,，用吸管輕輕吹打均勻，使細(xì)胞懸??；
5、細(xì)胞計數(shù) 細(xì)胞濃度以5×105/ml為宜,。
6,、培養(yǎng)細(xì)胞
將復(fù)合細(xì)胞計數(shù)要求的細(xì)胞懸液吸到培養(yǎng)瓶中，將培養(yǎng)瓶放入37℃和5％CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)（略微擰松培養(yǎng)瓶蓋）,，換液的時間由細(xì)胞情況而定,。通常，除少數(shù)特別注明對DMSO 敏感的細(xì)胞外,， 絕大部分細(xì)胞株（包括懸浮性細(xì)胞）,， 在解凍之后， 可直接放入含有10-15ml（5－10倍）新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)角瓶中,， 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可,， 如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無法生長或貼附的問題。