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人c-sis試劑盒
一,、客戶收到細胞先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片,,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,,200X各一張),,排除細胞本身污染的情況;
收到細胞未開封,,出現污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞,。
二、如為貼壁細胞,,請在顯微鏡下觀察細胞密度:
1. 未超過80%匯合度時,,用75%酒精(建議配置75%酒精的水也是滅菌超純水,噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內,,嚴格無菌操作,;然后打開蓋子,,先把培養(yǎng)基吸出10ml左右,放在離心管里,,然后瓶口過火(嚴禁直接傾倒),,這樣可以保證不污染,再用10ml的移液管,,將剩余的培液全部吸出,,放于離心管中,培養(yǎng)瓶中只剩余10ml左右培液就可以了,。培養(yǎng)16hr(時間根據細胞生長情況調整)之后,,傳代或者凍存。
2. 超過80%匯合度時,,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng),。具體步驟如下:
1) 棄去培養(yǎng)液,用3ml PBS(不含鈣,,鎂離子)洗1-2次,;
2) 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于T25培養(yǎng)瓶中,倒轉放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預熱,,然后又將培養(yǎng)瓶倒轉大約30秒后,,在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓分散,,輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶,,細胞隨即脫落下來;
3) 加入6-8ml*培養(yǎng)基,,吸出,,分到新的培養(yǎng)瓶中,按要求分瓶,。
三,、如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液,,1000轉/分鐘離心5分鐘,,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶,。
注意:換液時一半用我們的培養(yǎng)基,,一半用你們的,以免細胞不適應而造成生長不好,。
四,、細胞出現問題,可重發(fā)的情況有哪些?判定標準是什么,?
?。?)細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失,、破損,、漏液等,重發(fā),;
?。?)凍存的細胞復蘇后,絕大多數細胞未存活,,重發(fā),;
(3)存活的細胞靜置24小時后,,絕大多數細胞未存活,,重發(fā);
?。?)凍存的細胞復蘇后或存活的細胞靜置4小時后并且未開封,,出現污染,重發(fā),;
?。?)視具體情況而定?!?/p>
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細胞培養(yǎng)技術3個原則:1,、用自己的一套試劑,,不要和別人混用;2,、勤觀察細胞,,像養(yǎng)寵物一樣喜愛和關心;3,、有規(guī)律地換液和傳代,,不要“三天打魚,兩天曬網”。
質量可靠,,售后有保障
★我?guī)旒毎?000種,,來源于美國ATCC,細胞都是經過嚴格質量控制。
凍存細胞時間為5-7個工作日,,活細胞為7-15個工作日,。
★由于細胞庫現有細胞類目多,為了不出現混亂錯誤,,需要了解相關細胞價格及詳細資料請老師,,對您造成的不便還請見諒!
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