大鼠前降鈣素試劑盒

我司大鼠前降鈣素試劑盒細(xì)胞近3000種,，來源于美國ATCC,細(xì)胞都是經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)量控制，在中國大陸努力搭建正牌細(xì)胞與國內(nèi)廣大科研人員之間的溝通橋梁,，還有更多相關(guān)實驗產(chǎn)品,，標(biāo)準(zhǔn)品，細(xì)胞株和實驗技術(shù)服務(wù)等等前期后續(xù)服務(wù),。 

細(xì)胞株

　　Q1. 液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好,？還是冷凍好？

　　要冷藏??！因為液體培養(yǎng)基經(jīng)冷凍后再經(jīng)溶化時，其溶液的pH值會發(fā)生改變,，溶液往往變堿,，某些成分溶解也會受到影響對細(xì)胞生長不利。故液體培養(yǎng)基一定要存放在冷藏箱中,，通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個月 ~ 一年,。

　　Q2. 液體培養(yǎng)基中谷氨酰胺的作用，及使用方法,。

　　幾乎所有的細(xì)胞對谷氨酰胺有較高的要求,，細(xì)胞需要谷氨酰胺合成蛋白質(zhì)，在缺少谷氨酰胺時,，細(xì)胞生長不良而死亡,。所以，各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺,。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,，應(yīng)置-20 ?C冰凍保存，用前加入培養(yǎng)基中。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4 ?C 冰箱儲存兩周以上時,，應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺,。基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)細(xì)胞中心在其服務(wù)項目中配制分裝了高濃度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支）,。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml*培養(yǎng)基中,，其終濃度為2mM/ml培養(yǎng)基。包裝為粉紅色,，-24?C保存,。

1、原理：
(1)計算細(xì)胞數(shù)目可用血球計數(shù)盤或是Coultercounter粒子計數(shù)器自動計數(shù),。
(2)血球計數(shù)盤一般有二個chambers,，每個chamber中細(xì)刻9個1mm2大正方形，其中4個角落之正方形再細(xì)刻16個小格,，深度均為0.1mm,。當(dāng)chamber上方蓋上蓋玻片后，每個大正方形之體積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml,。使用時,，計數(shù)每個大正方形內(nèi)之細(xì)胞數(shù)目，乘以稀釋倍數(shù),，再乘以104,，即為每ml中之細(xì)胞數(shù)目。
(3)存活測試之步驟為dyeexclusion,，利用染料會滲入死細(xì)胞中而呈色,，而活細(xì)胞因細(xì)胞膜完整，染料無法滲入而不會呈色,。一般使用藍(lán)色之trypan blue染料,，如果細(xì)胞不易吸收trypan blue，則用紅色之Erythrosin bluish,。計算細(xì)胞活率：活細(xì)胞數(shù)/(活細(xì)胞數(shù)+死細(xì)胞數(shù))×100%,。計數(shù)應(yīng)在臺盼蘭染色后數(shù)分鐘內(nèi)完成，隨時間延長,，部分活細(xì)胞也開始攝取染料;因為臺盼蘭對蛋白質(zhì)有很強的親和力,，用不含血清的稀釋液，可以使染色計數(shù)更為準(zhǔn)確,。

　　Q4.細(xì)胞特性
在細(xì)胞培養(yǎng)之前,，我們要了解一下你所要養(yǎng)細(xì)胞的基本特性，這點可以從細(xì)胞的產(chǎn)品說明書或者從ATCC細(xì)胞庫查詢,。除此之外我們還要知道每管細(xì)胞的數(shù)量,，建議分裂或傳代的比例,，和已知細(xì)胞的傳代代次等信息。

　　Q5.準(zhǔn)備培養(yǎng)基
復(fù)蘇細(xì)胞時需要準(zhǔn)備合適的培養(yǎng)基,，血清和細(xì)胞生長所需的添加劑。大部分培養(yǎng)細(xì)胞所用的培養(yǎng)體系,，可以在訂購細(xì)胞系時獲得,。
雖然大多數(shù)細(xì)胞系可以在不止一種培養(yǎng)基中生長，但是當(dāng)培養(yǎng)基改變時,，細(xì)胞的性質(zhì)也會變化,。因此，使用細(xì)胞庫推薦的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞會獲得的效果,。

　　Q6.開啟凍存管
1.準(zhǔn)備一個培養(yǎng)瓶,，加入適宜細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基，液體體積按照說明書的推薦配置,，并平衡培養(yǎng)基的溫度和pH（CO2）,。　
2.在37℃水浴中或細(xì)胞的正常生長溫度下將凍存管輕輕搖動,。解凍要快,，約2分鐘或直到冰晶融化即可。
3.從水浴中取出凍存管并用浸泡或噴灑70%乙醇的方式來消毒,。進一步的操作均需在無菌操作臺中嚴(yán)格無菌條件下進行,。
4.擰開凍存管的管帽并將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到一個含有9 ml推薦培養(yǎng)基的無菌離心管中。通過溫和離心（125×g 10 min）除去冷凍保護劑（DMSO）,。棄去上清,，并用1或2 ml*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。將這些細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到含有*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中并輕輕搖動以*混勻,。
5.培養(yǎng)24小時后檢查細(xì)胞狀態(tài)并在需要時進行傳代,。

　　Q7. 培養(yǎng)用液pH對細(xì)胞生長的影響

　　由于，大多數(shù)細(xì)胞適宜pH為7.2~7.4,，偏離此范圍對細(xì)胞將產(chǎn)生有害的影響,。各種細(xì)胞對pH的要求也不*相同，原代培養(yǎng)細(xì)胞一般對pH變動耐受差,，無限細(xì)胞系耐受力強,。但總體來說，細(xì)胞耐酸性比耐堿性強一些,，偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長,。因此，我們在配制培養(yǎng)用液時,，可把液體的pH稍微調(diào)得偏酸一些,。液體在經(jīng)過0.10um或0.22um濾膜過濾時,，溶液的pH還會向上浮動0.2左右。