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應(yīng)用領(lǐng)域 |
化工 |
TALLA-1 ELISA樣品收集,、處理及保存方法:血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。檢測對象:人血清/血漿及相關(guān)液體實驗方法:雙抗原夾心法進(jìn)行測
TALLA-1 ELISA
TALLA-1 ELISA樣品收集,、處理及保存方法:血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。檢測對象:人血清/血漿及相關(guān)液體實驗方法:雙抗原夾心法進(jìn)行測
ELISA試劑分類: RD試劑盒,,GBD試劑盒,IBL試劑盒
2,、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3,、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4、 保存------如果樣品不立即使用,,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,,避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,,檢測前先離心或過濾,。
不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
常用生化試劑作用:
1,、蛋白酶K:能水解消化蛋白質(zhì),特別是與DNA結(jié)合的組蛋白,,在尿素和SDS中穩(wěn)定,。一般工作濃度是50—100μg/ml,推薦反應(yīng)緩沖液:50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2,。
2,、SDS:十二烷基硫酸鈉,溶解細(xì)胞膜上的脂類與蛋白質(zhì),,因而溶解膜蛋白而破壞細(xì)胞膜,,并解離細(xì)胞中的核蛋白,SDS 還能與蛋白質(zhì)結(jié)合而沉淀,。
3,、IPTG:異丙基-β-D-硫代半乳糖苷, 常用于藍(lán)白斑篩選及IPTG誘導(dǎo)的細(xì)菌內(nèi)的蛋白表達(dá)等,。IPTG和乳糖的結(jié)構(gòu)相似,,所以它和乳糖一樣,可以與乳糖操縱元的阻遏蛋白結(jié)合,,
使阻遏蛋白的空間構(gòu)像變化,,四聚體解聚成單體,失去與操縱子特異性結(jié)合的能力,,從而解除了阻遏蛋白的作用,,使其后的基因得以轉(zhuǎn)錄合成利用乳糖的酶類。與乳糖不同的是,,
IPTG不被 β-半乳糖苷酶水解,。常與X-GAL一起用于藍(lán)白斑篩選。作用*的誘導(dǎo)劑,,不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定,。
4、X-gal:5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷,,是IPTG的顯色試劑,,在IPTG的催化下顯藍(lán)色。常跟IPTG一起用與藍(lán)白斑篩選,。
5,、G418:一種抗生素,,對幾乎所有的細(xì)胞都有毒性,是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染zui常用的選擇試劑,。當(dāng)neo基因被整合進(jìn)真核細(xì)胞基因組合適的地方
6,、DMSO:二甲基亞砜。實驗室常用于作液體層析溶劑,,同時用作測試物質(zhì)紫外消光值上時用作參照物,。能溶于所有烷烴和烯烴。
7,、曲拉通X-100:TritonX-100,,用的細(xì)胞裂解液成分之一,在保護(hù)蛋白活性方面有一定作用,, 能力介于NP40和SDS之間,,偏向于NP40。
8,、NP-40:很溫和的去垢劑,,1%濃度的基本可以破壞掉胞膜,而對核膜破壞的作用弱,,結(jié)合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白,。
9、BSA:牛血清白蛋白,, 主要起維持滲透壓作用,、PH緩沖作用、載體作用和營養(yǎng)作用,。在動物細(xì)胞無血清培養(yǎng)中,,添加白蛋白可起到生理和機(jī)械保護(hù)作用和載體作用。常用于蛋白定量中的內(nèi)參和抗體稀釋液,。
10,、甲酰胺: 甲酰胺被用作凝膠電泳中RNA的穩(wěn)定劑,也用于穩(wěn)定毛細(xì)管電泳中的變性單股DNA,。
注意事項:
1,、去正規(guī)耗材經(jīng)銷處。
2,、注意耗材的防偽標(biāo)志?,F(xiàn)在各大廠商的耗材都增加了不同的防偽標(biāo)志。如果貼有防偽標(biāo)準(zhǔn),,注意是正好貼在封口處,如果拆封了的話標(biāo)志也會碎了,。
一,、常見elisa試劑盒
1,、細(xì)胞因子檢測試劑盒:
如白介素、選擇素,、集落刺激因子,,腫瘤壞死因子,干擾素,,轉(zhuǎn)化生長因子,,趨化因子,細(xì)胞因子受體,,粘附分子,,生長因子,凋亡因子等等
2,、肝纖維化檢測elisa試劑盒:
如纖維連接蛋白,,透明質(zhì)酸,膠原,,基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子,,基質(zhì)金屬蛋白酶,層粘蛋白等等
3,、心肌梗塞檢測elisa試劑盒:
如肌鈣蛋白,,肌紅蛋白,C-反應(yīng)蛋白等等
4,、內(nèi)分泌檢測elisa試劑盒:
如免疫球蛋白,抗鏈O-aso,類風(fēng)濕因子RF,C反應(yīng)蛋白,微量白蛋白,β-2微球蛋白human,鐵蛋白,轉(zhuǎn)鐵蛋白transferrin等等
二,、食品安全檢驗elisa試劑盒:
食品中的激素、藥物,、霉菌毒素,、過敏原殘留、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測試劑盒,,以及微生物,、維生素等的檢測產(chǎn)品。
三,、植物病毒,、細(xì)菌、真菌,、植物激素和轉(zhuǎn)基因作物的農(nóng)業(yè)診斷試劑盒
四,、動植物疾病診斷類如豬、牛,、羊,、馬等家畜和禽類以及寵物類檢測試劑盒