C3bR ELISA

C3bR ELISA樣品收集,、處理及保存方法：血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。檢測(cè)對(duì)象:人血清/血漿及相關(guān)液體實(shí)驗(yàn)方法:雙抗原夾心法進(jìn)行測(cè)

ELISA試劑分類(lèi): RD試劑盒,，GBD試劑盒，IBL試劑盒

2,、 血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè),。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
 3、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
 4,、 保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾,。
不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

常用生化試劑作用：

1,、蛋白酶K：能水解消化蛋白質(zhì)，特別是與DNA結(jié)合的組蛋白,，在尿素和SDS中穩(wěn)定,。一般工作濃度是50—100μg/ml，推薦反應(yīng)緩沖液：50mM Tris-HCl （pH7.5）,10mM CaCl2,。

2,、SDS：十二烷基硫酸鈉,，溶解細(xì)胞膜上的脂類(lèi)與蛋白質(zhì)，因而溶解膜蛋白而破壞細(xì)胞膜,，并解離細(xì)胞中的核蛋白,，SDS 還能與蛋白質(zhì)結(jié)合而沉淀。

3,、IPTG：異丙基-β-D-硫代半乳糖苷,， 常用于藍(lán)白斑篩選及IPTG誘導(dǎo)的細(xì)菌內(nèi)的蛋白表達(dá)等。IPTG和乳糖的結(jié)構(gòu)相似,，所以它和乳糖一樣,，可以與乳糖操縱元的阻遏蛋白結(jié)合，

使阻遏蛋白的空間構(gòu)像變化,，四聚體解聚成單體,，失去與操縱子特異性結(jié)合的能力，從而解除了阻遏蛋白的作用,，使其后的基因得以轉(zhuǎn)錄合成利用乳糖的酶類(lèi),。與乳糖不同的是，

IPTG不被 β-半乳糖苷酶水解,。常與X-GAL一起用于藍(lán)白斑篩選,。作用*的誘導(dǎo)劑，不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定,。

4,、X-gal：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷，是IPTG的顯色試劑,，在IPTG的催化下顯藍(lán)色,。常跟IPTG一起用與藍(lán)白斑篩選。

5,、G418：一種抗生素,，對(duì)幾乎所有的細(xì)胞都有毒性，是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染zui常用的選擇試劑,。當(dāng)neo基因被整合進(jìn)真核細(xì)胞基因組合適的地方

6,、DMSO：二甲基亞砜。實(shí)驗(yàn)室常用于作液體層析溶劑,，同時(shí)用作測(cè)試物質(zhì)紫外消光值上時(shí)用作參照物,。能溶于所有烷烴和烯烴。

7,、曲拉通X-100：TritonX-100,，用的細(xì)胞裂解液成分之一，在保護(hù)蛋白活性方面有一定作用， 能力介于NP40和SDS之間,，偏向于NP40。

8,、NP-40：很溫和的去垢劑,，1%濃度的基本可以破壞掉胞膜，而對(duì)核膜破壞的作用弱,，結(jié)合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白,。

9、BSA：牛血清白蛋白,， 主要起維持滲透壓作用,、PH緩沖作用、載體作用和營(yíng)養(yǎng)作用,。在動(dòng)物細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)中,，添加白蛋白可起到生理和機(jī)械保護(hù)作用和載體作用。常用于蛋白定量中的內(nèi)參和抗體稀釋液,。

10,、甲酰胺： 甲酰胺被用作凝膠電泳中RNA的穩(wěn)定劑，也用于穩(wěn)定毛細(xì)管電泳中的變性單股DNA,。

注意事項(xiàng)：

1,、去正規(guī)耗材經(jīng)銷(xiāo)處。

2,、注意耗材的防偽標(biāo)志?，F(xiàn)在各大廠商的耗材都增加了不同的防偽標(biāo)志。如果貼有防偽標(biāo)準(zhǔn),，注意是正好貼在封口處,，如果拆封了的話標(biāo)志也會(huì)碎了。

這個(gè)標(biāo)志是上面有一條跟人民幣上一樣的金屬線,，假的標(biāo)志是做不出來(lái)的,。所以通過(guò)這招分辨還是比較實(shí)用的。

3,、看耗材內(nèi)部的做工,，很多假耗材都是采用的翻新產(chǎn)品，內(nèi)部做工較為一般,，各種元件的結(jié)合度都比較松,。