CAT#:51004117V/510041160/51004116C/51004116F
PRODUCT NAME:Citrate stabilized 100nm-1 OD
SIZE:25 ml/100 ml/250 ml/500 ml
產品品牌:Nanoimmunotech
液體類標本：
標本必須為液體，不含沉淀,。包
CAT#:51004117V/510041160/51004116C/51004116F
PRODUCT NAME:Citrate stabilized 100nm-1 OD
SIZE:25 ml/100 ml/250 ml/500 ml
產品品牌:Nanoimmunotech
液體類標本：
標本必須為液體,，不含沉淀,。包括血清,、血漿,、尿液,、胸腹水,、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿等,。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標本量收集體積＝100ul×檢測種類,。
◇ 血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。收集上清,。如有沉淀形成,，應再次離心。
◇ 血漿：
應根據試劑盒的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，加入10％(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,。如有沉淀形成，應再次離心,。
◇ 尿液,、胸腹水、腦脊液：
用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清。如有沉淀形成,，應再次離心,。
◇ 細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,。檢測細胞內的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,，細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心,。
◇ 組織標本：
切割標本后，稱取重量,。加入一定量的PBS,，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin。用手工或勻漿器將標本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清置于-20度或- 70度保存，如有必要,，可以將樣品濃縮干燥,。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用,。
液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好,？還是冷凍好？
要冷藏?。∫驗橐后w培養(yǎng)基經冷凍后再經溶化時,，其溶液的pH值會發(fā)生改變,，溶液往往變堿，某些成分溶解也會受到影響對細胞生長不利,。故液體培養(yǎng)基一定要存放在冷藏箱中,，通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個月 ~ 一年。
細胞計數及存活測試
1,、原理：
(1)計算細胞數目可用血球計數盤或是Coultercounter粒子計數器自動計數,。
(2)血球計數盤一般有二個chambers，每個chamber中細刻9個1mm2大正方形,，其中4個角落之正方形再細刻16個小格,，深度均為0.1mm。當chamber上方蓋上蓋玻片后,，每個大正方形之體積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml,。使用時,，計數每個大正方形內之細胞數目，乘以稀釋倍數,，再乘以104,，即為每ml中之細胞數目。
(3)存活測試之步驟為dyeexclusion,，利用染料會滲入死細胞中而呈色,，而活細胞因細胞膜完整，染料無法滲入而不會呈色,。一般使用藍色之trypan blue染料,，如果細胞不易吸收trypan blue，則用紅色之Erythrosin bluish,。計算細胞活率：活細胞數/(活細胞數+死細胞數)×100%,。計數應在臺盼蘭染色后數分鐘內完成，隨時間延長,，部分活細胞也開始攝取染料;因為臺盼蘭對蛋白質有很強的親和力,，用不含血清的稀釋液，可以使染色計數更為準確,。
細胞特性
在細胞培養(yǎng)之前,，我們要了解一下你所要養(yǎng)細胞的基本特性，這點可以從細胞的產品說明書或者從ATCC細胞庫查詢,。除此之外我們還要知道每管細胞的數量,，建議分裂或傳代的比例，和已知細胞的傳代代次等信息,。
準備培養(yǎng)基
復蘇細胞時需要準備合適的培養(yǎng)基,，血清和細胞生長所需的添加劑。大部分培養(yǎng)細胞所用的培養(yǎng)體系,，可以在訂購細胞系時獲得,。
雖然大多數細胞系可以在不止一種培養(yǎng)基中生長，但是當培養(yǎng)基改變時,，細胞的性質也會變化,。因此，使用細胞庫推薦的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞會獲得的效果,。
開啟凍存管
1.準備一個培養(yǎng)瓶,，加入適宜細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基，液體體積按照說明書的推薦配置,，并平衡培養(yǎng)基的溫度和pH（CO2）,。
2.在37℃水浴中或細胞的正常生長溫度下將凍存管輕輕搖動,。解凍要快,，約2分鐘或直到冰晶融化即可,。
3.從水浴中取出凍存管并用浸泡或噴灑70%乙醇的方式來消毒。進一步的操作均需在無菌操作臺中嚴格無菌條件下進行,。
4.擰開凍存管的管帽并將內容物轉移到一個含有9 ml推薦培養(yǎng)基的無菌離心管中,。通過溫和離心（125×g 10 min）除去冷凍保護劑（DMSO）。棄去上清,，并用1或2 ml*培養(yǎng)基重懸細胞,。將這些細胞懸液轉移到含有*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中并輕輕搖動以*混勻。
5.培養(yǎng)24小時后檢查細胞狀態(tài)并在需要時進行傳代,。
由于,，大多數細胞適宜pH為7.2~7.4，偏離此范圍對細胞將產生有害的影響,。各種細胞對pH的要求也不*相同,，原代培養(yǎng)細胞一般對pH變動耐受差，無限細胞系耐受力強,。
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