C3c 優(yōu)質(zhì)試劑盒

產(chǎn)品貨號:A701
產(chǎn)品名稱:C3c
產(chǎn)品規(guī)格:250 µL
產(chǎn)品品牌:Quidel
參考價格(美元):249
C3c 優(yōu)質(zhì)試劑盒

液體類標(biāo)本：
標(biāo)本必須為液體,，不含沉淀,。包括血清、血漿,、尿液,、胸腹水、腦脊液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿,。每個標(biāo)本量收集體積＝100ul×檢測種類,。
◇      血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。收集上清,。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。
◇      血漿：應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10％(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
◇      尿液、胸腹水,、腦脊液：
用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
◇      細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。
◇      組織標(biāo)本：
切割標(biāo)本后,，稱取重量。加入一定量的PBS,，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶),。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清置于-20度或- 70度保存,，如有必要，可以將樣品濃縮干燥,。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用。

細(xì)胞株

　　Q1. 液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好,？還是冷凍好,？

　　要冷藏！,！因為液體培養(yǎng)基經(jīng)冷凍后再經(jīng)溶化時,，其溶液的pH值會發(fā)生改變，溶液往往變堿,，某些成分溶解也會受到影響對細(xì)胞生長不利,。故液體培養(yǎng)基一定要存放在冷藏箱中，通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個月 ~ 一年,。

人胃平滑肌細(xì)胞

　　Q2. 液體培養(yǎng)基中谷氨酰胺的作用,，及使用方法。

　　幾乎所有的細(xì)胞對谷氨酰胺有較高的要求,，細(xì)胞需要谷氨酰胺合成蛋白質(zhì),，在缺少谷氨酰胺時，細(xì)胞生長不良而死亡,。所以,，各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,，應(yīng)置-20 ?C冰凍保存,，用前加入培養(yǎng)基中。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4 ?C 冰箱儲存兩周以上時,，應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺,?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)細(xì)胞中心在其服務(wù)項目中配制分裝了高濃度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支）。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml*培養(yǎng)基中,，其終濃度為2mM/ml培養(yǎng)基,。包裝為粉紅色，-24?C保存,。

　　Q3.細(xì)胞計數(shù)及存活測試
1,、原理：
(1)計算細(xì)胞數(shù)目可用血球計數(shù)盤或是Coultercounter粒子計數(shù)器自動計數(shù)。
(2)血球計數(shù)盤一般有二個chambers,，每個chamber中細(xì)刻9個1mm2大正方形,，其中4個角落之正方形再細(xì)刻16個小格，深度均為0.1mm,。當(dāng)chamber上方蓋上蓋玻片后,，每個大正方形之體積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用時,，計數(shù)每個大正方形內(nèi)之細(xì)胞數(shù)目,，乘以稀釋倍數(shù)，再乘以104,，即為每ml中之細(xì)胞數(shù)目,。
(3)存活測試之步驟為dyeexclusion，利用染料會滲入死細(xì)胞中而呈色,，而活細(xì)胞因細(xì)胞膜完整,，染料無法滲入而不會呈色。一般使用藍(lán)色之trypan blue染料,，如果細(xì)胞不易吸收trypan blue,，則用紅色之Erythrosin bluish。計算細(xì)胞活率：活細(xì)胞數(shù)/(活細(xì)胞數(shù)+死細(xì)胞數(shù))×100%,。計數(shù)應(yīng)在臺盼蘭染色后數(shù)分鐘內(nèi)完成,，隨時間延長，部分活細(xì)胞也開始攝取染料;因為臺盼蘭對蛋白質(zhì)有很強(qiáng)的親和力,，用不含血清的稀釋液,，可以使染色計數(shù)更為準(zhǔn)確。