C8 優(yōu)質(zhì)試劑盒

產(chǎn)品貨號:A406/A708
產(chǎn)品名稱:C8 優(yōu)質(zhì)試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:250 µL
產(chǎn)品品牌:Quidel
參考價(jià)格(美元):254/249
液體類標(biāo)本：
標(biāo)本必須為液體，不含沉淀,。包括血清,、血漿、尿液,、胸腹水,、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿等,。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個(gè)標(biāo)本量收集體積＝100ul×檢測種類,。
◇      血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。收集上清,。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
◇      血漿：
應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，加入10％(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。
◇      尿液,、胸腹水、腦脊液：
用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
◇      細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
◇      組織標(biāo)本：
切割標(biāo)本后，稱取重量,。加入一定量的PBS,，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清置于-20度或- 70度保存，如有必要,，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用,。

人內(nèi)臟脂肪細(xì)胞細(xì)胞株

　　Q1. 人內(nèi)臟脂肪細(xì)胞液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好？還是冷凍好,？

　　要冷藏?。∫?yàn)橐后w培養(yǎng)基經(jīng)冷凍后再經(jīng)溶化時(shí),，其溶液的pH值會發(fā)生改變,，溶液往往變堿，某些成分溶解也會受到影響對細(xì)胞生長不利,。故液體培養(yǎng)基一定要存放在冷藏箱中,，通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個(gè)月 ~ 一年。

人口腔表皮樣癌細(xì)胞

　　Q2.人內(nèi)臟脂肪細(xì)胞 液體培養(yǎng)基中谷氨酰胺的作用,，及使用方法,。

　　幾乎所有的細(xì)胞對谷氨酰胺有較高的要求，細(xì)胞需要谷氨酰胺合成蛋白質(zhì),，在缺少谷氨酰胺時(shí),，細(xì)胞生長不良而死亡。所以,，各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺,。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置-20 ?C冰凍保存,，用前加入培養(yǎng)基中,。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4 ?C 冰箱儲存兩周以上時(shí)，應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)細(xì)胞中心在其服務(wù)項(xiàng)目中配制分裝了高濃度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支）,。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml*培養(yǎng)基中，其終濃度為2mM/ml培養(yǎng)基,。包裝為粉紅色,，-24?C保存。

　　Q3.細(xì)胞計(jì)數(shù)及存活測試
1,、原理：
(1)計(jì)算細(xì)胞數(shù)目可用血球計(jì)數(shù)盤或是Coultercounter粒子計(jì)數(shù)器自動(dòng)計(jì)數(shù),。
(2)血球計(jì)數(shù)盤一般有二個(gè)chambers，每個(gè)chamber中細(xì)刻9個(gè)1mm2大正方形,，其中4個(gè)角落之正方形再細(xì)刻16個(gè)小格,，深度均為0.1mm。當(dāng)chamber上方蓋上蓋玻片后,，每個(gè)大正方形之體積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml,。使用時(shí)，計(jì)數(shù)每個(gè)大正方形內(nèi)之細(xì)胞數(shù)目,，乘以稀釋倍數(shù),，再乘以104，即為每ml中之細(xì)胞數(shù)目,。
(3)存活測試之步驟為dyeexclusion,，利用染料會滲入死細(xì)胞中而呈色，而活細(xì)胞因細(xì)胞膜完整,，染料無法滲入而不會呈色,。一般使用藍(lán)色之trypan blue染料，如果細(xì)胞不易吸收trypan blue,，則用紅色之Erythrosin bluish,。計(jì)算細(xì)胞活率：活細(xì)胞數(shù)/(活細(xì)胞數(shù)+死細(xì)胞數(shù))×100%。計(jì)數(shù)應(yīng)在臺盼蘭染色后數(shù)分鐘內(nèi)完成,，隨時(shí)間延長,，部分活細(xì)胞也開始攝取染料;因?yàn)榕_盼蘭對蛋白質(zhì)有很強(qiáng)的親和力，用不含血清的稀釋液,，可以使染色計(jì)數(shù)更為準(zhǔn)確,。